蚯蚓纖溶酶抗肝癌轉(zhuǎn)移作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討蚯蚓纖溶酶（earthworm fibrinolytic enzyme，EFE）對(duì)人肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　 方法：體外培養(yǎng)高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞株 HCCLM3，接種于裸鼠的頸背部皮下，四周后處死荷瘤鼠并剝離瘤體，將腫瘤切割為1mm×1mm×1mm大小的瘤塊，接種于新一批裸鼠的肝臟，建立裸鼠人肝癌高轉(zhuǎn)移原位移植模型。造模后七天將裸鼠隨機(jī)分為三個(gè)組，分別給予生理鹽水、低劑量EFE（800uku/kg.d）、高劑量EFE

2、（1600uku/kg.d）連續(xù)灌胃30天。給藥結(jié)束后七天處死裸鼠，打開(kāi)腹腔，肉眼直接觀察種植瘤的生長(zhǎng)情況、肝內(nèi)播散及腹腔種植情況，計(jì)算肝內(nèi)播散率及腹腔種植率；完整剝離種植瘤并稱(chēng)重；通過(guò)病理切片觀察肺臟中轉(zhuǎn)移的腫瘤灶數(shù)目；并通過(guò)RT-PCR及Western Blot方法檢測(cè)種植瘤中焦點(diǎn)粘附激酶（focus adhesionkinase，F(xiàn)AK）及β1整合素的表達(dá)。
　　 結(jié)果：所有裸鼠均可見(jiàn)原位種植瘤的生長(zhǎng)，造模成功率100％。

3、（1）生理鹽水對(duì)照組、低劑量EFE組、高劑量EFE組原位種植瘤瘤重分別為（1.57±0.05）g、（1.46±0.08）g、（1.36±0.11）g，高劑量組瘤重小于低劑量組，低劑量組瘤重小于生理鹽水對(duì)照組，三組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；（2）三組種植瘤肝內(nèi)播散率分別為100％、71.43％、14.29％，高劑量組肝內(nèi)播散率最低，生理鹽水對(duì)照組肝內(nèi)播散率最高，高劑量組與對(duì)照組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；（3）三組腹腔種

4、植率分別為85.71％、45.28％、14.29％，高劑量組種植率最低，而生理鹽水對(duì)照組最高，高劑量組與對(duì)照組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。（4）三組肺臟中腫瘤轉(zhuǎn)移灶數(shù)目平均為（65.00±4.40）個(gè)、（57.00±5.16）個(gè)、（49.86±7.01）個(gè)，高劑量組肺臟轉(zhuǎn)移灶數(shù)目小于低劑量組，并進(jìn)一步小于生理鹽水對(duì)照組，三組間比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。（5）低劑量組移植瘤中FAK及β1整合素在mRNA及蛋白水平的表達(dá)較