甲乙煎抑制基質(zhì)金屬蛋白酶在肝癌組織中的表達及抗轉(zhuǎn)移作用的實驗研究.pdf

1、目的： 觀察甲乙煎對肝癌H22模型小鼠癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移情況的影響，并進一步探討其作用機理，重點探討甲乙煎對肝癌組織基質(zhì)金屬蛋白酶表達的影響，以更好地為臨床提供客觀而科學的依據(jù)。 方法： 1 動物分組 清潔級雄性BALB/C小鼠75只，5-6周齡，體重18±2g，隨機分為5組：病理模型對照組，西藥(5-Fu)對照組，甲乙煎小、中、大劑量組，每組各15只。 2 復制小鼠肝癌H<,22>淋巴道轉(zhuǎn)移模型復

2、蘇后的肝癌H<,22>瘤株，注入5-6周齡BALB/C小鼠腹腔內(nèi)，待7-10天后，小鼠腹圍增至最大時，抽取腹水，傳代2-3次。之后，將腹圍增至最大時的荷瘤小鼠，頸椎脫臼法處死，腹腔內(nèi)注射無菌生理鹽水5ml，再用一次性滅菌注射器抽取腹水。將收集的腹水經(jīng)800轉(zhuǎn)/分離心3分鐘，棄上清，計數(shù)，調(diào)整細胞濃度至10<'8>/ml，于各組小鼠左后肢爪墊內(nèi)側(cè)皮下注射瘤細胞懸液0.05mI(5x10<'6>個/ml)。 3 給藥 自造模

3、第2天開始給藥。病理模型對照組以生理鹽水0.4ml/只·天灌胃；西藥(5-Fu)對照組以5-Fu 2mg/ml,0.2ml/只·天腹腔注射；甲乙煎小、中、大劑量組分別以甲乙煎1g/ml、2g/ml、4g/ml，0.4 ml/只·天灌胃，每日一次，連續(xù)15天。 4取材及固定實驗結束后第2天，將各組小鼠頸椎脫臼法處死，稱體重，取胭窩、髂動脈旁、腎門淋巴結、脾及胸腺，并稱重。取各組小鼠左足爪墊皮下局部瘤組織，避開壞死和出血區(qū)，立即入4％多聚甲

4、醛，固定12小時后，常規(guī)脫水，透明，石蠟包埋。超薄切片機切片，片厚5μm，烘箱內(nèi)烘干備用。 結果： 1甲乙煎治療組與模型組相比，其淋巴結指數(shù)有降低趨勢，其中小劑量組有顯著性差異(P<0.05)；大、中劑量組可使胸腺指數(shù)明顯升高(P<0.05)。西藥5-Fu治療組與病理模型對照組相比較，脾指數(shù)明顯降低(P<0.01)，而中藥各治療組則無此副作用(P>0.05)。 2中藥各治療組可明顯降低肝癌組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MM

5、P<,2>、MMP<,9>、TIMP<,2>)的表達水平。 結論： 1甲乙煎可明顯降低胭窩淋巴結、髂動脈旁淋巴結和腎門淋巴結的重量，降低淋巴結指數(shù)，減輕淋巴結的轉(zhuǎn)移程度，以甲乙煎小劑量組最為明顯。 2各治療組可明顯提高肝癌小鼠胸腺指數(shù)，以甲乙煎大劑量組最為明顯；與病理模型組相比較，西藥對照組明顯抑制脾指數(shù)，而甲乙煎各治療組則無此副作用。 3甲乙煎可抑制肝癌組織MMP-2、MMP-9的表達水平，同時提高肝癌