A型尼曼-匹克病的分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、研究背景:
　　 遺傳代謝病是一類(lèi)嚴(yán)重危害人類(lèi)身心健康的難治疾患,不僅為家庭及社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān),而且危及子孫后代,直接影響人口素質(zhì)的提高。由于多數(shù)遺傳病的治療仍頗為艱難或費(fèi)用昂貴,難以普遍實(shí)施。因此為減少遺傳病的發(fā)生,廣泛開(kāi)展預(yù)防工作就顯得格外重要。
　　 目的:
　　 研究?jī)蓚€(gè)中國(guó)人A型尼曼-匹克病(Niemann-Pick Disease,NPD)家系發(fā)病的分子基礎(chǔ)及基因檢測(cè)在中國(guó)人NPD家系基因診斷中的意義

2、,并探討其基因型與臨床表型的關(guān)系。
　　 方法:
　　 收集兩位先證者及其家庭成員的臨床資料,采用基因組小劑量抽提試劑盒從2個(gè)家系共6名成員的外周血中提取基因組DNA,根據(jù)人類(lèi)基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得的SMPD1(SPHINGOMYELIN PHOSPHODIESTERASE1)基因序列(NM000543)設(shè)計(jì)4對(duì)引物,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR,Polymerase ChainReaction)進(jìn)行擴(kuò)增,并采用PCR產(chǎn)物回收試

3、劑盒進(jìn)行產(chǎn)物回收后DNA直接測(cè)序法進(jìn)行基因突變檢測(cè),測(cè)序結(jié)果應(yīng)用DNAman軟件進(jìn)行序列對(duì)比分析,確定基因突變位點(diǎn),對(duì)測(cè)序異常的片段重新進(jìn)行PCR擴(kuò)增與測(cè)序,以驗(yàn)證結(jié)果的可靠性。
　　 結(jié)果:
　　 1.PCR.擴(kuò)增所得片段與預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段大小一致,沒(méi)有非特異擴(kuò)增帶,可以進(jìn)行純化與測(cè)序。
　　 2.家系1中先證者外顯子1正反向測(cè)序在107堿基處顯示C單峰,顯示cDNA107T→C的純合突變。其父親、母親及姐姐外顯子

4、1正反向測(cè)序在107堿基處顯示T／C雜合雙峰,顯示cDNA107T→C的雜合突變。107T→C的突變將導(dǎo)致SMPD1編碼的轉(zhuǎn)錄因子第36位氨基酸的密碼子GTG被GCG取代,從而使其編碼的纈氨酸變成丙氨酸(V36A),屬于錯(cuò)義突變。
　　 3.家系2中先證者外顯子1正反向測(cè)序在107堿基處顯示C單峰,顯示cDNA107T→C的純合突變。其母外顯子1正反向測(cè)序在107堿基處顯示T／C雜合雙峰,顯示cDNA107T→C的雜合突變。10

5、7T→C的突變將導(dǎo)致SMPD1編碼的轉(zhuǎn)錄因子第36位氨基酸的密碼子GTG被GCG取代,從而使其編碼的纈氨酸變成丙氨酸(V36A),屬于錯(cuò)義突變。
　　 結(jié)論:
　　 1.證實(shí)SMPD1基因是本研究中兩個(gè)無(wú)關(guān)的A型尼曼匹克病家系的致病基因,與國(guó)外報(bào)道一致。
　　 2.兩個(gè)家系患兒均為SMPD1基因純合突變致病,家庭其他成員為表型正常的基因突變攜帶者。
　　 3.證實(shí)cDNA107T→C突變是引起本研究中兩個(gè)