2型豬鏈球菌lmb-htp操縱子的鑒定及其編碼蛋白作為疫苗候選分子的研究.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcus suis,簡(jiǎn)稱S.suis)是一種重要的人獸共患病病原菌。2型豬鏈球菌(S.suis2)是35個(gè)血清型中臨床分離率最高和致病性最強(qiáng)的血清型,近年來(lái)在全世界范圍內(nèi)多個(gè)國(guó)家流行,給全世界的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失;并且還多次出現(xiàn)S.suis2感染人并導(dǎo)致中毒性休克綜合癥的報(bào)道,造成了嚴(yán)重的公共衛(wèi)生事件。因此,加強(qiáng)對(duì)S.suis2感染的預(yù)防和控制成為一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。由于目前對(duì)S.suis2的致病機(jī)制尚不明

2、確,再加上近年來(lái)多重耐藥菌株的出現(xiàn),對(duì)S.suis2的預(yù)防和控制尚沒(méi)有有效的藥物和治療措施。
　　 疫苗作為防控病原菌的安全有效的手段成為應(yīng)對(duì)S. Suis2感染的研究熱點(diǎn)。而以細(xì)菌表面蛋白為靶標(biāo)的亞單位疫苗由于安全性高和生產(chǎn)成本低備受青睞。
　　 最近在肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌和無(wú)乳鏈球菌等鏈球菌中發(fā)現(xiàn)的lmb-htp操縱子編碼兩個(gè)表面蛋白,分別是層粘連蛋白結(jié)合蛋白(Laminin binding protein,Lmb

3、)和組氨酸三聚體蛋白(Histidine triad protein.,Htp)。這兩個(gè)蛋白都有鋅離子結(jié)合特性,同時(shí),每個(gè)蛋白又具有各自獨(dú)特的生物學(xué)功能。Lmb能結(jié)合人層粘連蛋白,促進(jìn)細(xì)菌對(duì)宿主的黏附和侵襲;Htp能夠結(jié)合補(bǔ)體H因子,抑制補(bǔ)體C3在細(xì)菌表面的沉積,從而促進(jìn)細(xì)菌逃避免疫系統(tǒng)的殺傷。由于這兩個(gè)蛋白都高度保守,位于細(xì)菌表面并具有較好的免疫原性,被認(rèn)為是疫苗開(kāi)發(fā)的候選分子。尤其是在肺炎鏈球菌中,Htp蛋白己經(jīng)被應(yīng)用于一個(gè)多價(jià)疫苗

4、的研究。但是迄今為止還沒(méi)有關(guān)于S.suis2 lmb-htp操縱子的報(bào)道及其編碼蛋白免疫保護(hù)性的研究。
　　 本研究通過(guò)對(duì)S.suis2中國(guó)強(qiáng)毒株05ZYH33的全基因組序列分析,發(fā)現(xiàn)了lmb和htp的同源基因,并通過(guò)生物信息學(xué)分析和實(shí)驗(yàn)證實(shí)了它們共轉(zhuǎn)錄,組成S.suis2的lmb-htp操縱子。該發(fā)現(xiàn)為S.suis2的致病機(jī)制和免疫逃避的闡明提供了新的研究方向。PCR檢測(cè)還發(fā)現(xiàn)lmb-htp操縱子存在于所有被檢測(cè)的S.suis

5、2不同地域和毒力的分離株中,并且在大多數(shù)不同血清型的S.suis中都有存在。同時(shí)本研究通過(guò)原核表達(dá)、純化獲得了重組Lmb和HtpS蛋白,并證實(shí)這兩個(gè)蛋白在S.suis2感染宿主時(shí)表達(dá),刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。全血?dú)⒕把a(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)兔抗HtpS血清不但能增強(qiáng)全血對(duì)S.suis2的殺傷作用,還能促進(jìn)補(bǔ)體C3在細(xì)菌表面的沉積。利用小鼠模型對(duì)Lmb和HtpS蛋白的免疫保護(hù)性進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),它們都能在小鼠模型中發(fā)揮保護(hù)作用,可以作為疫苗開(kāi)發(fā)的