臨床健康豬中豬鏈球菌2型的分離鑒定及其PrsA蛋白的免疫保護(hù)性研究.pdf

1、豬鏈球菌（Streptococcus suis，SS）根據(jù)莢膜抗原的不同共分為35個血清型(1-34，1/2)。其中豬鏈球菌2型(SS2)不僅可以引起豬的發(fā)病和死亡，還是一種人獸共患病原，可以引起人的感染和死亡。在我國，1998年（江蘇）和2005年（四川）各發(fā)生過一次SS2爆發(fā)。研究表明，引起這兩次爆發(fā)的SS2基因組中包含一段89kb大小的致病島(即89K PAI)，引起一種被稱為鏈球菌毒素樣休克綜合征（Streptococcal t

2、oxic-like shock syndrome，STLSS）的疾病，而非2型豬鏈球菌或國外分離株基因組中沒有89K致病島。
　　豬鏈球菌的治療目前主要依靠抗生素，由于不規(guī)則使用抗生素導(dǎo)致的后果就是豬鏈球菌的耐藥問題越來越嚴(yán)重，尤其多重耐藥菌株的出現(xiàn)使治療的效果很不理想，健康豬中豬鏈球菌的攜帶率高居不下。雖然現(xiàn)階段也有一些市售疫苗在使用，但是這些疫苗不具備交叉保護(hù)作用。
　　本實驗室前期通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)一種豬鏈球菌2型

3、分泌型PrsA(Parvulin-like peptidyl-prolyl isomerase)蛋白，即細(xì)小蛋白樣肽基-脯氨?；悩?gòu)酶。功能研究證明，該蛋白具有細(xì)胞毒性和促炎效應(yīng)。PrsA蛋白在其他細(xì)菌中如李斯特菌、嗜肺軍團(tuán)桿菌、幽門螺桿菌與糞鏈球菌等，已被發(fā)現(xiàn)在細(xì)菌感染與免疫中起重要作用。其中PPIases家族蛋白被認(rèn)為是一種潛在的DNA疫苗或亞單位疫苗候選抗原，但該蛋白在豬鏈球菌中尚未見相關(guān)報道。
　　1.臨床健康豬中豬鏈球菌

4、2型的分離鑒定
　　通過健康豬鼻拭子樣品的采集、分離和鑒定，分析目前浙江省安吉縣部分豬場豬鏈球菌的攜帶情況和發(fā)病情況;也通過豬鏈球菌2型分離株的生物學(xué)特性來分析其致病力強弱;為了探索SS分離株與2型強毒株HA9801的親緣關(guān)系，我們利用多位點序列分型(Multilocus sequence typing, MLST)獲得了所有SS分離株的序列型(ST)，通過序列型對比和序列分析，分析其親緣關(guān)系;同時，我們對SS分離株進(jìn)行了耐藥性分

5、析。
　　應(yīng)用PCR方法從280份健康豬鼻拭子樣品中鑒定出115份SS陽性，攜帶率為41％，從115份陽性樣品中分離獲得28株豬鏈球菌，其中包括2株豬鏈球菌2型（16AJM9和16AJ343），分別分離自健康母豬和育肥豬，但這兩株分離株的致病力較弱，與實驗室已有的強毒株相比，屬于弱毒株;試驗可知，28株SS分離株中有20株為新的序列型(ST753-770)，占分離株數(shù)量的71％，其中2型SS分離株16AJM9和16AJ343的序列

6、型分別為ST768和ST769，并且所有SS分離株與HA9801的親緣關(guān)系較遠(yuǎn);所有SS分離株均呈現(xiàn)出多重耐藥，尤其對氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類和林可胺類抗生素的耐藥比較嚴(yán)重，但對青霉素類和頭孢菌素類比較敏感。
　　2.PrsA免疫保護(hù)性研究
　　本研究首次對豬鏈球菌2型PrsA蛋白進(jìn)行了免疫保護(hù)性研究，通過對此蛋白的保守性及免疫原性進(jìn)行鑒定，最終通過小鼠動物模型來評估PrsA蛋白的免疫保護(hù)作用。
　　研究結(jié)果:PrsA具

7、備很好的免疫原性，可以刺激機體的免疫應(yīng)答，并誘導(dǎo)高效價抗體;它既定位于表面，又分泌至胞外，具備保護(hù)性抗原的主要特性;PrsA蛋白免疫小鼠對2型和9型強毒攻擊具備一定的保護(hù)作用，且可能由于它在SS9的表面豐度高于SS2，所以導(dǎo)致PrsA對SS9的保護(hù)作用(66％)要優(yōu)于SS2(50％)。
　　綜上所述，本研究為深入了解豬鏈球菌及其2型菌株在浙江安吉縣部分豬場的流行狀況、潛在的耐藥性問題以及PrsA蛋白作為亞單位疫苗的可能性提供了科學(xué)