南方鲇源豚鼠氣單胞菌胞外產(chǎn)物活性與致病性研究.pdf

1、“南方鲇潰瘍綜合癥”是近年來(lái)南方鲇養(yǎng)殖中出現(xiàn)的一種急性致死性的細(xì)菌性傳染病。該病具有流行廣、發(fā)病快、死亡率高等特點(diǎn)，以體表潰瘍、肝、脾、腎腫大，腹水和胃腸道充血、出血為主要特征。該病給我國(guó)南方鲇養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)對(duì)南方鲇源豚鼠氣單胞菌的胞外產(chǎn)物(extracellularproducts，ECP)的活性和致病性進(jìn)行研究，并分離純化得到一種分子量為32.2KD的溶血素，確定其為豚鼠氣單胞菌的致病因子，以上研究為闡明該病的致

2、病機(jī)理提供理論依據(jù)。具體試驗(yàn)方法及結(jié)果如下： (1)采用瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定了南方鲇源豚鼠氣單胞菌胞外產(chǎn)物酶活性和溶血活性，同時(shí)采用微量板法對(duì)胞外產(chǎn)物的細(xì)胞毒性進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示：南方鲇源豚鼠氣單胞菌胞外產(chǎn)物具有蛋白酶、脂酶、明膠酶和脲酶活性，同時(shí)具有很強(qiáng)的溶血活性和細(xì)胞毒性。 (2)豚鼠氣單胞菌胞外產(chǎn)物腹腔注射小白鼠，結(jié)果顯示：豚鼠氣單胞菌胞外產(chǎn)物對(duì)小白鼠具有明顯的致病性，其LD50為1.70mg/kg體重。實(shí)驗(yàn)小鼠主要表

3、現(xiàn)為呼吸困難，食欲減退；肝腫大；肺淤血，腸道擴(kuò)張、壁變薄，腸腔內(nèi)充有大量氣體和黃色黏液。病理組織學(xué)上，心臟肌纖維變性，橫紋消失，肌間毛細(xì)血管擴(kuò)張充血、出血，部分肌漿凝固，紅染；肝細(xì)胞空泡變性、壞死；腎間質(zhì)增寬，炎性水腫，細(xì)胞離散，大量單核細(xì)胞、中性白細(xì)胞等炎性細(xì)胞滲出，腎小血管?chē)?yán)重瘀血，腎小球充血；脾出血，淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少；肺微靜脈擴(kuò)張淤血，肺泡腔內(nèi)充斥大量紅細(xì)胞；腸絨毛壞死脫落；胃上皮變性、壞死，脫落，粘膜下層水腫，病變嚴(yán)重的病例

4、可見(jiàn)固有膜、粘膜下層壞死。 (3)豚鼠氣單胞菌胞外產(chǎn)物肌肉注射南方鲇，結(jié)果顯示：豚鼠氣單胞菌胞外產(chǎn)物對(duì)南方鲇具有明顯的致病性，其LD50為0.802mg/kg。試驗(yàn)魚(yú)主要表現(xiàn)為體表潰瘍、腹水；肝、脾、腎腫大，充血，出血；胃積液，胃表面充血；腸腔內(nèi)充有大量黃色粘液。病理組織學(xué)上表現(xiàn)骨骼肌和心肌壞死斷裂，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);肝臟嚴(yán)重的空泡變性；腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死、間質(zhì)間大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；脾充血出血，淋巴細(xì)胞減少；胃腸粘膜上皮細(xì)胞變性

5、壞死脫落。細(xì)胞病理學(xué)上，病魚(yú)主要器官的細(xì)胞均有較為嚴(yán)重的損傷，細(xì)胞腫脹，超微結(jié)構(gòu)破壞。具體表現(xiàn)為肌纖維壞死，明暗帶模糊不清；肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量空泡，線粒體腫脹，染色質(zhì)聚集邊移；脾淋巴細(xì)胞染色質(zhì)溶解消失，線粒體腫脹；腎臟內(nèi)大量的白細(xì)胞浸潤(rùn)，上皮細(xì)胞壞死。血液病理變化表現(xiàn)為注射后24小時(shí)和48小時(shí)，RBC和Hb含量顯著減少，WBC增加，紅細(xì)胞脆性增加，血清中的AST、ALT、LDH活性顯著升高和Cr含量也顯著升高。 (4)采用硫酸銨鹽

6、析，DEAE-SephadexA50凝膠層析法從豚鼠氣單胞菌胞外產(chǎn)物中提純了一種分子量為32.2KDa的單一多肽溶血素。該溶血活性強(qiáng)，溶血價(jià)為25，對(duì)南方鲇有致病性，其LD50為0.29mg/kg體重。注射后的南方鲇表現(xiàn)為腹部膨大、腹水，肝、脾、腎腫大，淤血、出血；胃腸道內(nèi)充有大量粘液，粘膜充血、出血。組織病理學(xué)表現(xiàn)為骨骼肌水腫，變性，肌漿紅染，甚至肌纖維壞死，溶解、斷裂：肝細(xì)胞變性、壞死，血竇擴(kuò)張淤血；腎小管上皮細(xì)胞變性、壞死，病變嚴(yán)