兩株林麝源銅綠假單胞菌生物學(xué)特性及胞外產(chǎn)物特性研究.pdf

1、林麝化膿性肺炎是一種由銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）感染引起的以呼吸困難、鼻孔膿液流出為主要特征的慢性疾病。本試驗旨在研究從患化膿性疾病的林麝體內(nèi)分離的兩株銅綠假單胞菌（SP-N和SP-Q）的生物學(xué)特性、在單獨和1∶1共同培養(yǎng)情況下的培養(yǎng)性狀以及其胞外產(chǎn)物的生物特性及理化性質(zhì)，為臨床上對該疾病的診療和防疫提供理論依據(jù)。
　　對SP-N和SP-Q進行常規(guī)細菌學(xué)鑒定和16S rRNA鑒定，發(fā)現(xiàn)2株菌

2、均為革蘭氏陰性，其中SP-N為中長桿菌，不產(chǎn)生綠色色素;SP-Q為短桿菌，產(chǎn)生綠色色素。經(jīng)16S rRNA目標片段測序并與NCBI比對，發(fā)現(xiàn)SP-N和SP-Q與P.Aeruginosa的同源性在99％以上。血清型分型顯示，SP-N為銅綠假單胞菌G型，SP-Q為銅綠假單胞菌B型。
　　SP-N、SP-Q及SP-N和SP-Q（按1∶1）在37℃普通肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其生長曲線基本一致。單獨培養(yǎng)時，SP-N在14 h時活菌數(shù)最高，為5.

3、6×1010CFU/mL; SP-Q在12 h時活菌數(shù)最高，為1.4×1010 CFU/mL;1∶1比例共同培養(yǎng)時，在12h時活菌數(shù)最高，為1.0×1010 CFU/mL。用12h的SP-N和SP-Q單獨培養(yǎng)液及按1∶1共同培養(yǎng)的SP-N和SP-Q培養(yǎng)液接種小鼠，其半數(shù)致死量分別為5.05×106 CFU/mL、5.22×108 CFU/mL和3.57×108 CFU/mL，且兩兩之間半數(shù)致死量差異顯著(P＜0.05)，說明SP-N的培

4、養(yǎng)液對小鼠有較強致病性，而共同培養(yǎng)并未增強致病性。
　　經(jīng)平板玻璃紙法提取銅綠假單胞菌SP-N和SP-Q的胞外產(chǎn)物(extracellularproducts，ECP)，測得SP-N的ECP蛋白濃度為0.8mg/mL，SP-Q的ECP蛋白濃度為0.36 mg/mL。通過SDS-PAGE對ECP的蛋白進行分析，發(fā)現(xiàn)SP-N和SP-Q的ECP蛋白條帶基本一致，主要有7個蛋白條帶，其分子量分別為19 kDa、23 kDa、37 kDa、

5、42 kDa、52 kDa、59 kDa和66 kDa。用制備的鼠抗SP-N血清對2菌株的ECP進行印跡雜交，結(jié)果顯示SP-N的ECP免疫反應(yīng)條帶主要有2條，分子量約為42 kDa和66 kDa。SP-Q的ECP免疫反應(yīng)條帶主要有1條，分子量約為42 kDa。
　　采用杯碟法對ECP的蛋白活性進行分析，發(fā)現(xiàn)SP-N和SP-Q的ECP均具有蛋白酶、明膠酶及脲酶的活性和溶血毒性;無卵磷脂酶、脂肪酶、淀粉酶和DNA酶活性。通過固體培養(yǎng)和