人CD40-IgG1Fc段融合蛋白的表達(dá)、鑒定及其對EBV轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：構(gòu)建人CD40-IgGlFc段融合蛋白的真核表達(dá)載體CD40-IgGlFc/pcDNA3．1(+)；轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞并進(jìn)行融合基因表達(dá)的鑒定、純化；探討該融合蛋白對EBV轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞凋亡的影響。 方法：應(yīng)用T-A克隆技術(shù)和亞克隆技術(shù)，構(gòu)建人CD40膜外段-IgGlFc段融合蛋白的真核表達(dá)載體CD40-IgGlFc/pcDNA3.1(+)，將其轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株并篩選，進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)。通過RT-PCR、Western blot及E

2、LISA法鑒定融合基因的表達(dá)；通過AO/EB雙染色法及DNA ladder法檢測CD40-IgGlFc段融合蛋白對EBV轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果：限制酶酶切鑒定及DNA測序分析結(jié)果證明成功地構(gòu)建了真核表達(dá)載體CD40-IgGlFc/pcDNA3.1(+)。建立了CHO細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)株。Western blot及ELISA法鑒定細(xì)胞培養(yǎng)上清中有融合蛋白的表達(dá)；AO/EB雙染色法及DNA laddet，法均檢測到CD40-IgG