過表達(dá)CD40L基因?qū)asumi-1-ADM細(xì)胞株增殖、凋亡及耐藥的影響.pdf

1、目的：體外構(gòu)建阿霉素(Adriamycin, ADM)耐藥的Kasumi-1細(xì)胞株(Kasumi-1/ADM)，初步探討過表達(dá)CD40L基因?qū)asumi-1/AD增殖、凋亡及耐藥的影響。
　　方法：⑴采用濃度梯度逐步遞增ADM的方法，建立Kasumi-1/ADM耐藥細(xì)胞株。⑵利用CCK-8法檢測CD40L過表達(dá)對Kasumi-1、Kasumi-1/ADM細(xì)胞增殖的抑制率，計(jì)算兩種細(xì)胞的IC50，確定其耐藥指數(shù)(Resistanc

2、e Index，RI)。⑶過表達(dá)CD40L慢病毒轉(zhuǎn)染Kasumi-1/ADM細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測病毒轉(zhuǎn)染效率，qRT-PCR法驗(yàn)證CD40L基因過表達(dá)。⑷將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞分為三組：Kasumi-1/ADM對照組、空轉(zhuǎn)Kasumi-1/ADM組、過表達(dá)CD40L的Kasumi-1/ADM組，CCK-8法檢測過表達(dá)CD40L對該三組細(xì)胞增殖-毒性的影響；Hoechst33342/PI雙染法檢測凋亡；qRT-PCR檢測耐藥及增殖相關(guān)基因MDR1

3、、MRP、PCNA的mRNA表達(dá)水平變化。
　　結(jié)果：⑴成功構(gòu)建了針對 ADM耐藥的人急性髓系白血病 Kasumi-1/ADM細(xì)胞株。ADM作用于Kasumi-1、Kasumi-1/ADM細(xì)胞24h后IC50有差異(P<0.05)，其IC50值分別為0.88±0.04μg/mL、6.00±0.17μg/mL，Kasumi-1/ADM相對于Kasumi-1細(xì)胞的耐藥指數(shù)為6.85±0.26。⑵慢病毒成功轉(zhuǎn)染Kasumi-1/ADM細(xì)

4、胞，經(jīng)嘌呤霉素篩選后，空轉(zhuǎn)組、過表達(dá)CD40L組Kasumi-1/ADM細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率分別為95.6％、96.9%；未轉(zhuǎn)染組、空轉(zhuǎn)組、過表達(dá)CD40L組Kasumi-1/ADM細(xì)胞的CD40L相對表達(dá)倍數(shù)分別為：1.00±0.07、1.03±0.19、215.09±28.83，過表達(dá)CD40L組細(xì)胞CD40L基因的相對表達(dá)水平較 Kasumi-1/ADM組、空轉(zhuǎn)組明顯增加(P<0.05)。⑶過表達(dá) CD40L組Kasumi-1/ADM細(xì)胞

5、與未轉(zhuǎn)染組、空轉(zhuǎn)組Kasumi-1/ADM細(xì)胞相比，增殖慢(P<0.05)。⑷柔紅霉素(DNR)作用于未轉(zhuǎn)染組、空轉(zhuǎn)組、過表達(dá)CD40L組Kasumi-1/ADM細(xì)胞24h后，其IC50值分別為：5.819±0.101、5.915±0.102、1.502±0.050，過表達(dá)CD40L組細(xì)胞的IC50值明顯低于未轉(zhuǎn)染組、空轉(zhuǎn)組(P<0.05)。⑸DNR干預(yù)前，未轉(zhuǎn)染組、空轉(zhuǎn)組、過表達(dá) CD40L組 Kasumi-1/ADM細(xì)胞凋亡率分別為

6、(1.72±0.11)%、(1.60±0.09)%、(7.33±0.45)%，干預(yù)后，其凋亡率分別為(9.17±0.93)%、(9.10±0.26)%和(35.87±1.70)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑹DNR干預(yù)前，未轉(zhuǎn)染組、空轉(zhuǎn)組、過表達(dá)CD40L組Kasumi-1/ADM細(xì)胞MDR1基因相對表達(dá)水平分別為：1.02±0.23、1.00±0.35、0.04±0.01；MRP基因相對表達(dá)水平分別為：1.04±0.31、1.

7、00±0.20、0.13±0.01；PCNA基因相對表達(dá)水平分別為：1.04±0.35、1.03±0.45、0.49±0.18。干預(yù)后，三組細(xì)胞MDR1基因相對表達(dá)水平分別為：1.13±0.28、1.08±0.28、0.03±0.01；MRP基因相對表達(dá)水平分別為：1.21±0.52、1.11±0.32、0.07±0.01；PCNA基因相對表達(dá)水平分別為：1.00±0.45、1.08±0.06、0.42±0.15。過表達(dá)CD40L載體轉(zhuǎn)