胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該文以VNTR為靶抗原構(gòu)建胰腺癌核酸疫苗,探索疫苗所誘生的免疫應(yīng)答,以進(jìn)一步研究疫苗對(duì)胰腺癌的治療作用.實(shí)驗(yàn)共分為三部分:第一部分 胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗的構(gòu)建和體外轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn);以人胰腺癌腫瘤相關(guān)抗原MUC1的最具免疫原性的序列片段VNTR為靶抗原,將其編碼基因克隆于真核表達(dá)載體pcDNA3.1/Myc-his(+)A質(zhì)粒中,構(gòu)建胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗.疫苗構(gòu)建后進(jìn)行體外轉(zhuǎn)染試驗(yàn),了解VNTR基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)

2、.結(jié)論:自行構(gòu)建的胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗序列完全正確,可在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)VNTR.第二部分 胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗免疫正常小鼠的評(píng)價(jià);目的:以pcDNA3.1-VNTR/Myc-his(+)A重組質(zhì)粒肌注免疫C57BL/6小鼠,研究疫苗是否也在體內(nèi)表達(dá)VNTR,能否誘生MUC1特異性CTL就答為主的免疫應(yīng)答.此外,該研究在進(jìn)行免疫應(yīng)答的評(píng)價(jià)時(shí)還包括了特異性抗體檢測(cè)和細(xì)胞因子檢測(cè).結(jié)論:自行構(gòu)建的胰腺癌MUC1-V

3、NTR核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠后可誘生VNTR特異的CTL應(yīng)答和抗體應(yīng)答.第三部分 HBcAg(1-144)基因、GM-CSF增強(qiáng)胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗免疫效果的研究;目的:抗原特異性免疫應(yīng)答的誘生在很大程度上取決于機(jī)體對(duì)該抗原分子的處理和遞呈的效率.在這個(gè)過(guò)程中,任何促進(jìn)疫苗DNA的攝取、翻譯和抗原的有效加工和提呈的分子疫苗設(shè)計(jì)和免疫策略都可能上調(diào)疫苗的免疫效果.為了進(jìn)一步提高疫苗的免疫效果,在pcDNA3.1-VNT

4、R/Myc-his(+)A質(zhì)粒中插入了HBcAg(1-144)基因(C144基因),構(gòu)建了pcDNA3.1-VNTR-C144/Myc-his(+)A質(zhì)粒,進(jìn)一步以GM-CSF為免疫佐劑,免疫C57BL/6小鼠,研究GM-CSF和C144基因在疫苗誘發(fā)免疫應(yīng)答中的作用.結(jié)論;C144基因和GM-CSF均可增強(qiáng)疫苗的免疫效果.以GM-CSF為免疫佐劑的pcDN3.1-VNTR-C144/Myc-his(+)A質(zhì)粒在將來(lái)可能得以相對(duì)廣泛的應(yīng)