原花青素對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的腸道屏障損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、原花青素(Proanthocyanidin，PC)是自然界中廣泛存在的一大類多酚類聚合物的總稱，研究表明其安全性較高，具有豐富的生物學(xué)作用，在人體的生物利用率也很高，在營(yíng)養(yǎng)、醫(yī)藥、保健等領(lǐng)域的應(yīng)用日益廣泛。內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的一部分，又稱脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)，能誘導(dǎo)腸粘膜促炎因子表達(dá)升高，引起腸道炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致粘膜功能障礙，從而使腸粘膜受損，致使細(xì)菌易位，引起遠(yuǎn)隔器官感染。本研究分別以大鼠腸

2、隱窩上皮細(xì)胞(IEC-6)和雄性SD大鼠為研究對(duì)象，用內(nèi)毒素誘導(dǎo)炎性損傷，給予不同劑量的原花青素干預(yù)，從體外和體內(nèi)水平觀察其對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的炎性損傷的影響，探討原花青素對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的腸道屏障損傷的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　目的
　　1、研究原花青素對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的大鼠腸隱窩上皮細(xì)胞毒性的影響。
　　2、研究原花青素對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的大鼠腸道屏障損傷的影響。
　　3、探討原花青素對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的腸道屏障損傷的保護(hù)作用機(jī)制。

3、
　　方法
　　1、通過MTT試驗(yàn)、HE染色法和細(xì)胞創(chuàng)傷愈合試驗(yàn)檢測(cè)原花青素對(duì)LPS誘導(dǎo)損傷的IEC-6細(xì)胞增殖、分化和遷移的影響。通過倒置顯微鏡觀察原花青素對(duì)LPS誘導(dǎo)損傷的IEC-6細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的影響。
　　2、通過ELISA試驗(yàn)檢測(cè)原花青素對(duì)LPS誘導(dǎo)損傷的IEC-6細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)水平的影響。
　　3、對(duì)SD大鼠進(jìn)行原花青素灌

4、胃兩周后，腹腔注射LPS，6小時(shí)后處死。通過觀察大鼠臨床表現(xiàn)、血清TNF-α檢測(cè)、血清D-乳酸水平測(cè)定以及小腸粘液分泌型免疫球蛋白A(sIgA)測(cè)定來探討原花青素對(duì)LPS誘導(dǎo)的大鼠腸道屏障損傷的影響。
　　4、通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR試驗(yàn)(qRT-PCR)和Western Blot試驗(yàn)檢測(cè)原花青素對(duì)LPS誘導(dǎo)損傷的IEC-6細(xì)胞緊密連接蛋白o(hù)ccludin和claudin-1 mRNA表達(dá)水平及occludin蛋白表達(dá)水平的影響。<

5、br>　　結(jié)果
　　1、原花青素對(duì)LPS誘導(dǎo)損傷的IEC-6細(xì)胞增殖、分化、遷移具有促進(jìn)作用，并呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系，且隨著原花青素干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞遷移率呈上升的趨勢(shì)。細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究表明，原花青素對(duì)LPS誘導(dǎo)引起的細(xì)胞形態(tài)變化和細(xì)胞密度降低具有改善作用。
　　2、ELISA結(jié)果顯示原花青素能夠抑制LPS誘導(dǎo)損傷后IEC-6細(xì)胞TNF-α、IL-6和IL-1β分泌水平的上升，并且呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系。
　　3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)

6、果顯示腹腔注射LPS后，大鼠出現(xiàn)倦怠及抖動(dòng)，皮毛蓬松無(wú)光澤、呼吸急促、精神萎靡，腹瀉、腹脹等臨床表現(xiàn)，血清TNF-α分泌水平上升，血清D-乳酸含量增加，小腸粘液分泌型免疫球蛋白A合成降低。而原花青素能夠緩解LPS誘導(dǎo)后的腸道炎癥，改善大鼠的各種臨床癥狀，降低血清TNF-α分泌水平和血清D-乳酸水平，提高小腸粘液分泌型免疫球蛋白A的含量。
　　4、實(shí)時(shí)熒光定量PCR試驗(yàn)結(jié)果顯示原花青素能夠提高LPS誘導(dǎo)損傷的IEC-6細(xì)胞occlu

7、din和claudin-1 mRNA的表達(dá)水平。Western Blot試驗(yàn)結(jié)果顯示原花青素能夠提高LPS誘導(dǎo)損傷的IEC-6細(xì)胞緊密連接蛋白o(hù)ccludin的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)論
　　原花青素對(duì)LPS誘導(dǎo)損傷的IEC-6細(xì)胞增殖、分化、遷移具有促進(jìn)作用，能夠降低TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌水平。原花青素對(duì)LPS誘導(dǎo)引起的大鼠腸道屏障損傷有保護(hù)作用，體現(xiàn)在改善臨床不良癥狀、降低血清TNF-α和D-乳酸水平、提高