人工設計抗菌肽KL-18及其體外殺菌和抗瘤作用的研究.pdf

1、目的:
　　根據(jù)抗菌肽(antimicrobial peptide,AMP)結構和功能的關系,以新發(fā)現(xiàn)的抗菌肽LL-37為模板,從中選取其發(fā)揮抗菌作用必需的氨基酸序列,即其α-螺旋區(qū)域,對這段序列進行分析和個別氨基酸的替換,得到一種人工設計的新型抗菌肽,檢測其抗菌效果,同時觀察這種新型抗菌肽對腫瘤細胞的影響以判斷其應用于腫瘤免疫中的前景。
　　方法:
　　⑴在PubMed上找到LL-37的全長氨基酸序列,用蛋白質分析軟

2、件分析其結構,找出其發(fā)揮抗菌作用必需的α-螺旋序列,對α-螺旋序列進行疏水性以及螺旋形成等分析并替換部分氨基酸后送公司合成得到人工設計的新型抗菌肽;
　?、七x取大腸桿菌JM109,金黃色葡萄球菌臨床株,白色葡萄球菌臨床株,糞腸球菌耐氟喹諾酮類臨床株,糞腸球菌ATCC29212標準株做為我們的研究對象,采用微量稀釋法測定這種新型抗菌肽以及青霉素或者氨芐西林對他們的MIC值,并進行比較;
　　⑶將這種新型抗菌肽分別與HepaG2

3、細胞以及THP-1細胞在96孔板內共同孵育,收集不同濃度和不同時間段細胞培養(yǎng)液上清,檢測這兩株瘤細胞IL-8和TNF-α分泌量的變化,觀察這種新型抗菌肽誘導這兩株瘤細胞凋亡的作用。
　　結果:
　?、旁趯?LL-37氨基酸序列進行分析后找出了其中的α-螺旋序列,替換了其中的五個氨基酸,構建了理論上疏水性和抗菌能力更好的新型抗菌肽 KL-18,并送公司合成,從而得到了這種新型的抗菌肽;
　　⑵這種人工設計的新型抗菌肽具有

4、很好的殺菌活性,除了對金黃色葡萄球菌的殺菌能力與青霉素相同外,它對我們所研究的其余四株菌株的殺菌能力要顯著高于臨床上常用的抗生素,并且也要高于其來源肽LL-37;
　?、强咕腒L-18能夠抑制HepaG2表達IL-8,刺激HepaG2表達TNF-α。該肽能刺激THP-1細胞分泌IL-8和TNF-α。刺激HepaG2細胞分泌TNF-α具有時間依賴性。刺激THP-1細胞分泌IL-8和TNF-α具有劑量依賴性;
　?、瓤咕腒L

5、-18能夠誘導HepaG2細胞和THP-1細胞發(fā)生凋亡。
　　結論:
　?、懦晒υO計并合成新型抗菌肽KL-18。
　?、茰y定了KL-18對大腸桿菌JM109等五株菌株的抗菌能力,抗菌肽KL-18對大腸桿菌JM109等五種菌株有較理想的抗菌效果,且對耐藥菌株效果較好。
　?、荎L-18能影響HepG2細胞以及THP-1細胞對細胞因子IL-8和TNF-α的表達。
　?、菿L-18能誘導HepG2細胞以及THP-