番茄細(xì)菌性潰瘍病菌血清學(xué)、PCR檢測(cè)技術(shù)及其遺傳多樣性的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本文針對(duì)番茄細(xì)菌性潰瘍病菌(Clavibacter'reichiganensis subsp.michiganensis，簡(jiǎn)稱(chēng)Cmm)的血清學(xué)、PCR檢測(cè)方法和該病菌的遺傳多樣性做了了研究，主要研究結(jié)果如下： 用Cmm的菌體蛋白免疫家兔制備出該病菌的特異性抗血清，瓊脂雙向擴(kuò)散法測(cè)定其效價(jià)為1:80。該抗血清經(jīng)飽和硫酸銨沉淀、鹽析、葡聚糖凝膠過(guò)濾層析純化后能檢測(cè)出Cmm的樣品，而不與Clavibacter。michiganense

2、 subsp.Sepedonicum、Clavibactermichiganense subsp.insidiosum發(fā)生反應(yīng)。通過(guò)與Agdia公司研制的Cmm的ELISA試劑盒比較，證明該研究的間接ELISA法檢測(cè)特異性比ELISA試劑盒要高，時(shí)間更短，靈敏度相同，可應(yīng)用于田間檢測(cè)或室內(nèi)檢測(cè)。 用常規(guī)PCR方法和實(shí)時(shí)熒光PCR方法分別檢測(cè)Cmm菌懸液和田間采集的病組織，結(jié)果表明，常規(guī)PCR方法檢測(cè)靈敏度為105cfu/mL；T

3、aqMan探針實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)檢測(cè)靈敏度為103-4cfu/mL,比傳統(tǒng)PCR方法檢測(cè)靈敏度(105cfu/mL)提高10-100倍，且不需要瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色和Southern雜交。 用Rep-PCR法分析收集的33個(gè)番茄潰瘍病菌菌株，結(jié)果表明，用BOX引物分別擴(kuò)增出8-15條多態(tài)性條帶，分子量大小200-3000bp，大多數(shù)主要集中在500-2800bp之間；指紋圖譜分析結(jié)果為：在遺傳距離為0.18時(shí)，測(cè)試的

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