番茄潰瘍病菌的富集和快速分子生物學(xué)檢測(cè)方法研究.pdf

1、目的：番茄潰瘍病(Bacterial canker of tomato)是導(dǎo)致番茄大幅減產(chǎn)的最重要細(xì)菌性病害，嚴(yán)重影響番茄的產(chǎn)量和品質(zhì)。種子帶菌是該病大規(guī)模流行和遠(yuǎn)距離傳播的最主要途徑，種子上攜帶的微量病菌就可以引起該病的大規(guī)模流行。由于種子的帶菌率較低，傳統(tǒng)的種子檢測(cè)方法常常導(dǎo)致微量病菌被漏檢，不能滿足種子帶菌檢測(cè)的要求。因此，建立一種準(zhǔn)確、快速、靈敏的番茄種子帶菌檢測(cè)方法，對(duì)有效阻止有害生物入侵和蔓延具有重要的科學(xué)意義和實(shí)用價(jià)值。<

2、br>　　 方法：采用不經(jīng)過(guò)病原富集的方法如免疫學(xué)和分子生物學(xué)方法中的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、直接PCR(Direct-PCR)、巢式PCR(Nested-PCR)直接對(duì)番茄潰瘍病菌純菌液和模擬帶菌種子提取液進(jìn)行檢測(cè)，并與經(jīng)過(guò)病原富集后再結(jié)合PCR技術(shù)的方法如膜過(guò)濾PCR、BIO-PCR，以及將免疫學(xué)富集和PCR技術(shù)結(jié)合起來(lái)的硝酸纖維素膜捕獲法PCR、免疫捕捉PCR(IC-PCR)和免疫磁珠分離PCR(IMS-PCR)等檢測(cè)方法

3、進(jìn)行比較，并從檢測(cè)靈敏度、檢測(cè)周期，檢測(cè)穩(wěn)定性及檢測(cè)成本等角度對(duì)上述方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 結(jié)果：免疫學(xué)方法如ELISA在梯度稀釋的純菌液和模擬帶菌種子提取液中的檢測(cè)靈敏度均為106CFU/ml。單純的分子生物學(xué)方法如Direct-PCR和Nested-PCR在純菌液中的檢測(cè)靈敏度分別為104CFU/ml和102CFU/ml，在模擬帶菌種子提取液中的檢測(cè)靈敏度分別為106CFU/ml和104CFU/ml。膜過(guò)濾PCR在純菌液中的檢

4、測(cè)靈敏度為102CFU/ml。BIO-PCR在純菌液和模擬帶菌種子提取液中的檢測(cè)靈敏度均為101CFU/ml，但檢測(cè)周期較長(zhǎng)。硝酸纖維素膜捕獲法PCR在純菌液中的檢測(cè)靈敏度為101CFU/ml。IC-PCR在純菌液和模擬帶菌種子提取液中的檢測(cè)靈敏度分別為102CFU/ml和104CFU/ml，且檢測(cè)周期短、穩(wěn)定性高。IMS-PCR在純菌液和模擬帶菌種子提取液中的檢測(cè)靈敏度均為102CFU/ml，而且該方法簡(jiǎn)便快捷、檢測(cè)穩(wěn)定性高。