哈密瓜細(xì)菌性果斑病菌的分子檢測(cè)及群體遺傳分析.pdf

1、哈密瓜細(xì)菌性果斑病菌(Acidovorax avenae subsp．citrulli)是西瓜、甜瓜、哈密瓜等葫蘆科植物上的一種重要的病原細(xì)菌。近年來(lái)果斑病的發(fā)生趨勢(shì)有所上升，對(duì)我國(guó)哈密瓜生長(zhǎng)造成嚴(yán)重威脅。哈密瓜果斑病為典型的種傳細(xì)菌病害，因此種子檢疫成為防治此病害的重要手段。本研究建立了一套快速、準(zhǔn)確、靈敏的檢測(cè)方法，用于檢測(cè)哈密瓜種子攜帶的病原細(xì)菌。并利用BOX-PCR技術(shù)對(duì)果斑病菌進(jìn)行了遺傳多樣性分析。 本研究將hrp基因

2、作為檢測(cè)靶標(biāo)，根據(jù)hrpB2基因設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物HB<,2>F<,2>/HB<,2>R<,2>，用此特異引物可以從哈密瓜細(xì)菌性果斑菌株中擴(kuò)增出290bp的特異性片斷，而其余參試菌株和哈密瓜組織的PCR反應(yīng)結(jié)果為陰性，靈敏度試驗(yàn)證明可以檢測(cè)到目標(biāo)菌體的濃度為10<'2>CFU。用特異性引物對(duì)哈密瓜帶菌種子浸出液進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果可發(fā)現(xiàn)目的菌的存在。該實(shí)驗(yàn)首次將hrp基因做為靶標(biāo)，為快速檢測(cè)病原菌提供了新的方向。 采用BOX-

3、PCR技術(shù)，對(duì)新疆、寧夏、美國(guó)等的64個(gè)哈密瓜果斑病菌進(jìn)行遺傳多樣性分析，并與其它7種病原細(xì)菌進(jìn)行比較。在相似率達(dá)80％時(shí)，BOX-PCR將71個(gè)參試菌株分成了7個(gè)組群，哈密瓜果斑病菌歸于1、2組群，證明哈密瓜果斑病菌與嗜酸菌屬(Acidovorax)親緣關(guān)系近，與其它屬細(xì)菌關(guān)系較遠(yuǎn)。在相似率達(dá)90％時(shí)，BOX-PCR技術(shù)將64個(gè)果斑菌株分為5個(gè)組群，新疆、寧夏地區(qū)的菌株親緣關(guān)系非常近，并與國(guó)外的菌株親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。 對(duì)64個(gè)果斑