姜黃素對鼻咽癌NCE細胞的抗增殖效應及其誘導凋亡機制.pdf

1、目的及研究背景 鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)發(fā)病居頭頸部惡性腫瘤之首，也是我國南方地區(qū)高發(fā)的惡性腫瘤，發(fā)病年齡以40～50歲為高發(fā)組。單純放療僅適合于早期鼻咽癌，大多數(shù)鼻咽癌患者就診時多為晚期(Ⅲ+Ⅳ期約占85％)，中晚期或復發(fā)轉移的患者，目前采用放化療相結合的治療手段。頭頸部惡性腫瘤常選用以DDP+5-FU為基礎的化療方案，是治療鼻咽癌的最有效藥物之一，但由于年齡及本病的特點，患者往往不能耐

2、受現(xiàn)有大劑量化療和放療。 姜黃素(Curcumin，Cur)系從姜科植物姜黃中提取的酚性有效單體化合物，有抗氧化、抗突變、抗促癌、抗炎等廣泛的藥理作用，且價格低廉，毒性很低。關于該藥對鼻咽癌細胞作用的研究，國內外的相關報道較少。本課題研究姜黃素對鼻咽癌NCE細胞增殖的抑制作用，及其誘導NCE細胞凋亡的機制，為姜黃素的臨床應用提供實驗依據(jù)、奠定理論基礎。 方法 1.觀察姜黃素對鼻咽癌NCE細胞增殖的影響：應用MTT

3、比色法、集落形成實驗等檢測姜黃素對鼻咽癌NCE細胞增殖能力的影響。 2.研究姜黃素對鼻咽癌NCE細胞凋亡的誘導作用：應用AO/EB復合染色、電鏡、DNA片段化分析、TUNEL方法等檢測姜黃素對鼻咽癌NCE細胞凋亡的誘導作用。 3.探討姜黃素誘導鼻咽癌NCE細胞凋亡的分子機制。 ①應用FCM探討姜黃素對NCE細胞線粒體膜電位(△ψm)和Caspase3酶活性的影響。 ②應用Westernblot技術檢測姜黃

4、素對胞漿CytC蛋白表達的影響。 ③應用流式細胞術(FCM)、RT-PCR等方法探討姜黃素對FasmRNA及蛋白表達的影響。 結果 1.姜黃素可明顯抑制NCE細胞增殖：MTT比色法、集落形成實驗均顯示：25μmol/L濃度的姜黃素即能抑制NCE細胞增殖，且隨著藥物濃度的升高該抑制作用明顯增強，呈量效關系。 2.姜黃素可誘導NCE細胞凋亡：AO-EB染色可見NCE細胞核內濃縮聚集的染色質，呈現(xiàn)凋亡表象；電鏡

5、下可觀察到線粒體腫脹、凋亡小體等細胞凋亡的超微結構改變；DNA片段化分析可見典型的DNA降解“梯狀”條帶片段；TUNEL檢測可見明顯的棕色核凋亡細胞，與姜黃素共孵育12h、24h、48h的陽性率分別為25.6％、40.3％、54.5％。上述結果提示姜黃素可誘導NCE細胞凋亡。 3.姜黃素可啟動NCE細胞線粒體凋亡途徑和膜死亡受體途徑： ①FCM檢測示：姜黃素處理后NCE細胞△ψm下降，12h、24h、48h時的細胞陽性率

6、分別是26.8％、42.3％、68.2％。Caspase3酶活性增強，12h、24h、48h時的細胞陽性率分別是80.5％、100％、100％。 ②Westernblot檢測示：姜黃素處理后，NCE細胞胞漿Cyt-C蛋白表達逐漸增強，48h達到峰值。 ③FCM檢測示：與姜黃素共孵育12h、24h、48h后，NCE細胞的Fas蛋白表達率明顯升高。RT-PCR顯示FasmRNA表達增強，并隨作用時間的延長表達上調。