EYA4基因在食管鱗癌中的甲基化狀態(tài)及其抑制食管鱗癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究.pdf

1、在全世界范圍內(nèi)，食管癌的發(fā)病率在全部惡性腫瘤中排名第8位，其死亡率在全部惡性腫瘤中排名第6位。在世界各地，食管鱗癌都是食管癌的主要病理類型，尤其是在作為食管癌高發(fā)區(qū)的中國(guó)，食管鱗癌占食管癌總數(shù)的90％以上。在過(guò)去的幾十年中，雖然在食管癌的診療各方面都取得了較大的進(jìn)步，但是食管癌的總體生存率仍然沒(méi)有明顯改善，五年總體生存率不足14％。腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是食管癌預(yù)后差的主要原因之一。因此，研究食管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具體的分子機(jī)制，有助于尋找具有

2、臨床應(yīng)用價(jià)值的治療新靶點(diǎn)，為食管癌的治療提供新的治療思路和策略。
　　EYA4是一種非巰基蛋白酪氨酸磷酸酶，在哺乳動(dòng)物的組織器官發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用，并參與DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡、血管生成等生理過(guò)程。近年來(lái)有研究表明，EYA基因家族成員在多種腫瘤中存在異常甲基化和表達(dá)異常的現(xiàn)象。在本研究中，我們對(duì)EYA4基因在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用及其機(jī)制進(jìn)行了初步探討。
　　我們運(yùn)用MSP和BSP技術(shù)對(duì)50例食管鱗癌和癌旁組織以

3、及8株食管鱗癌細(xì)胞系中EYA4基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化水平進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在食管鱗癌組織中EYA4基因存在普遍的高甲基化現(xiàn)象，其甲基化比率(80％，40/50)明顯高于癌旁組織(58％，29/50)。在8株食管鱗癌細(xì)胞系中，KYSE30中EYA4基因啟動(dòng)子區(qū)為完全非甲基化狀態(tài)，其余7株細(xì)胞系均有不同程度的甲基化，其甲基化比率為87.5％(7/8)。進(jìn)一步通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析這8株食管鱗癌細(xì)胞系中EYA4 mRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，K

4、YSE30細(xì)胞系高表達(dá)EYA4，其余7株細(xì)胞系均低表達(dá)EYA4。而且在經(jīng)過(guò)5-aza-dC或TSA藥物誘導(dǎo)后，食管鱗癌細(xì)胞系中EYA4基因的表達(dá)水平明顯升高。
　　通過(guò)慢病毒載體系統(tǒng)在食管鱗癌細(xì)胞KYSE30中敲降EYA4基因能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，反之，在食管鱗癌細(xì)胞KYSE180和KYSE450中過(guò)表達(dá)EYA4基因能夠抑制腫瘤細(xì)胞的遷移。尾靜脈注射肺定植的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也證實(shí)EYA4基因能夠抑制食管鱗癌細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。進(jìn)一

5、步探討其機(jī)制發(fā)現(xiàn)，EYA4能夠抑制AKT/GSK3β/slug信號(hào)通路的激活，促進(jìn)E-cadherin的表達(dá)，抑制vimentin、MMP2、MMP9和MMP13的表達(dá)，從而發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
　　TGF-β1是食管癌細(xì)胞發(fā)生EMT過(guò)程中重要的誘導(dǎo)因子。在本研究中發(fā)現(xiàn)，TGF-β1能夠誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞發(fā)生明顯的EMT，表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化及EMT相關(guān)分子的表達(dá)改變，同時(shí)伴有EYA4表達(dá)的明顯減少。深入探討TGF-β

6、1誘導(dǎo)EYA4表達(dá)下調(diào)的機(jī)制發(fā)現(xiàn)，TGF-β1通過(guò)上調(diào)DNA甲基化酶DNMT1和DNMT3A的表達(dá)，可能誘導(dǎo)EYA4基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化，從而下調(diào)EYA4的表達(dá)水平。而且，在食管鱗癌細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)EYA4能夠通過(guò)抑制TGF-β1誘導(dǎo)的E-cadherin表達(dá)下降，vimentin和MMPs表達(dá)升高，從而抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EMT。
　　此外，在食管鱗癌細(xì)胞中，EYA4基因還能促進(jìn)DNA損傷的修復(fù)，抑制順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，維持基因