哈薩克族食管鱗癌甲基化基因及其病理學(xué)意義的研究.pdf

1、目的：篩選哈薩克族食管鱗癌甲基化基因，并研究其病理學(xué)意義。
　　方法：在細(xì)胞水平，采用人類全基因組寡核苷酸微陣列芯片，熒光雙交換法檢測5-雜氮-2’-脫氧胞苷（5-aza-CdR）干預(yù)的食管鱗癌細(xì)胞Eca109與正常培養(yǎng)的Eca109細(xì)胞中的差異表達(dá)基因，通過甲基化特異性PCR（MSP）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）分別驗(yàn)證其甲基化狀態(tài)和表達(dá)量變化；在組織水平，選取18對(duì)哈薩克族食管鱗癌組織樣本，通過MSP和qRT-PCR

2、進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞水平篩選出的高度甲基化基因的甲基化狀態(tài)和表達(dá)量變化，并分析其與哈薩克族食管鱗癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：經(jīng)5-aza-CdR干預(yù)的Eca109細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，細(xì)胞密度降低，細(xì)胞間接觸變松，細(xì)胞體積增大，細(xì)胞內(nèi)可見大量空泡，呈凋亡形態(tài)，存活細(xì)胞數(shù)減少?；蛐酒Y選獲得384個(gè)差異表達(dá)基因，其中303個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，81個(gè)基因表達(dá)下調(diào)；表達(dá)上調(diào)基因中，組織因子途徑抑制物-2（TFPI2）基因表達(dá)上調(diào)11.4

3、2倍，在Eca109細(xì)胞中，重復(fù)驗(yàn)證的MSP結(jié)果顯示：正常培養(yǎng)組甲基化陽性，干預(yù)組非甲基化陽性；其啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率在哈薩克族食管鱗癌組織中為45％。TFPI2基因表達(dá)量在細(xì)胞水平和哈薩克族食管鱗癌組織均有顯著差異（p＜0.05）。A激酶錨定蛋白12（AKAP12）基因表達(dá)上調(diào)4.05倍，但其啟動(dòng)子區(qū)甲基化在食管鱗癌發(fā)生率均較低，在細(xì)胞水平和哈薩克族食管鱗癌組織表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。TFPI2基因表達(dá)量及甲基化均與哈薩克族食管鱗癌組織的