牛初乳IgG含量測(cè)定及免疫膠體金半定量法的建立與應(yīng)用.pdf

1、牛初乳是奶牛正常分娩后最初幾天內(nèi)分泌的乳汁。近年來(lái)的研究表明，牛初乳中不僅含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而且含有大量的非營(yíng)養(yǎng)性功能組分，免疫球蛋白是其中重要成分之一。牛初乳中免疫球蛋白IgG占86％，為常乳的200倍，為人類(lèi)初乳的50倍，初乳中IgG含量與其他生物活性物質(zhì)含量具有一定的正相關(guān)性，所以檢測(cè)IgG含量是衡量牛初乳及其制品生物活性的最佳方法。 采用血清直接過(guò)DEAE-纖維素柱法提純抗體，提純的抗體經(jīng)瓊脂免疫雙擴(kuò)散和聚丙烯酰胺凝膠

2、電泳測(cè)定，結(jié)果顯示此法純化抗體，活性和純度均較高。采用改良后的瓊脂免疫單擴(kuò)散法檢測(cè)本地荷斯坦奶牛產(chǎn)后7d的初乳樣品IgG含量。結(jié)果表明：母牛產(chǎn)犢后7d內(nèi)，乳汁中IgG含量變化很大，變動(dòng)范圍為118.59～0.86mg/ml。每次擠乳IgG含量下降都很快，特別是前三次擠乳，每次IgG濃度下降率達(dá)50％以上；到第8次，已經(jīng)降到10mg/ml以下。所以生產(chǎn)乳制品應(yīng)以前7次擠出的初乳為原料最佳，若籠統(tǒng)地以3d、 5d或7d內(nèi)初乳為原料，

3、產(chǎn)品中IgG含量不僅低，而且每批次差異很大。采用檸檬酸酸三鈉還原氯金酸，制備了20nm粒徑的膠體金，顆粒均勻，在檢測(cè)時(shí)顏色清晰，易于辨析。膠體金標(biāo)記蛋白質(zhì)的最適穩(wěn)定量為24ug/ml，最適pH值為9.3。標(biāo)記后免疫膠體金用含有1％BSA和0.02％疊氮鈉的0.01mol/L的PBS作為穩(wěn)定劑，可使制備的免疫膠體金保存3個(gè)月以上。制作的檢測(cè)膜片可以在15min內(nèi)顯示結(jié)果，且結(jié)果可長(zhǎng)期保存。用本方法和瓊脂免疫單擴(kuò)散法對(duì)10份牛初乳樣品和6份