國(guó)人原發(fā)性青光眼CYP1B1基因的突變研究.pdf

1、青光眼是世界上僅次于白內(nèi)障的第二大致盲性眼病，具有高度的遺傳異質(zhì)性，根據(jù)發(fā)病原因可分為原發(fā)性青光眼和繼發(fā)性青光眼。原發(fā)性青光眼主要包括原發(fā)性先天性青光眼、原發(fā)性開(kāi)角型青光眼及原發(fā)性閉角型青光眼。原發(fā)性先天性青光眼(primary congenital glaucoma PCG)是嬰幼兒最常見(jiàn)的青光眼類(lèi)型，國(guó)外已在不同種族的人群中證實(shí)其主要致病基因?yàn)镃YP1B1基因，國(guó)內(nèi)只有3篇相關(guān)的報(bào)道，發(fā)現(xiàn)了3種CYP1B1基因的突變；原發(fā)性開(kāi)角型青

2、光眼(primary open-angle glaucoma POAG)是成人常見(jiàn)的青光眼類(lèi)型，已發(fā)現(xiàn)的3種與之相關(guān)的致病基因(MYOC，OPTN，WDR36)只能解釋不足10％的POAG患者的發(fā)病。近來(lái)，國(guó)外有學(xué)者在POAG患者中發(fā)現(xiàn)了CYP1B1基因的突變，這為研究POAG發(fā)病機(jī)制打開(kāi)了新的通路，但國(guó)內(nèi)尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。因此，在中國(guó)PCG和POAG患者中篩查CYP1B1基因突變，了解CYP1B1基因在我國(guó)PCG和POAG患者中的突變情況

3、，對(duì)認(rèn)識(shí)CYP1B1突變特點(diǎn)及相關(guān)青光眼的病因有一定意義。 第一部分中國(guó)原發(fā)性先天性青光眼CYPlBl基因的突變篩查 目的：分析中國(guó)PCG患者中CYP1B1基因的突變情況。 方法：收集41名原發(fā)性先天性青光眼患者臨床資料，抽取外周靜脈血制備基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)及異源雙鏈-單鏈構(gòu)像多態(tài)分析(Heteroduplex Analysis-Singl

4、e Strand Conformation Polymorphism，HA-SSCP)方法初步分析患者CYP1B1基因編碼區(qū)，含差異帶型的片段通過(guò)直接測(cè)序檢驗(yàn)，測(cè)序所得新發(fā)現(xiàn)采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP)分析方法在80名正常對(duì)照中驗(yàn)證。 結(jié)果：在14.6％(6／41)的PCG患者中發(fā)現(xiàn)了6種不同的突變，其中4種為新突變：2種缺失突變(c．72

5、6_747 de122bp，c.828delC)和2種錯(cuò)義突變(S336Y，1471S)，錯(cuò)義突變的位點(diǎn)均位于CYP1B1蛋白序列的保守核心結(jié)構(gòu)區(qū)(Conserved Core Structures CCS)。通過(guò)RFLP分析方法在80名正常對(duì)照中未發(fā)現(xiàn)這4種新突變。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)2種已報(bào)道過(guò)的錯(cuò)義突變(R469W，R390H)。在9。8％(4／41)的中國(guó)PCG患者中出現(xiàn)的R390H，為本研究中出現(xiàn)頻率最高的突變。前述6名PCG患

6、者中，2名攜帶CYP1B1的純合突變，其余4名攜帶復(fù)雜合突變。 結(jié)論：CYP1B1基因突變與約14.6％的中國(guó)PCG患者相關(guān)，并以常染色體隱性方式致PCG發(fā)病。已知的錯(cuò)義突變R390H可能為中國(guó)PCG患者中最常見(jiàn)的突變類(lèi)型。 第二部分中國(guó)原發(fā)性開(kāi)角型青光眼CYPlBl基因的突變篩查 目的：探討CYP1B1基因突變與POAG的關(guān)系，了解CYP1B1基因型與POAG表型間的對(duì)應(yīng)關(guān)系，為進(jìn)一步研究CYP1B1基因致病機(jī)

7、制奠定基礎(chǔ)。 方法：收集54名原發(fā)性開(kāi)角型青光日艮患者臨床資料，抽取外周靜脈血制備基因組DNA，采用PCR及HA-SSCP方法初步分析患者CYP1B1基因編碼區(qū)，含差異帶型的片段通過(guò)直接測(cè)序檢驗(yàn)，測(cè)序所得新發(fā)現(xiàn)采用HA-SSCP分析方法在80名正常對(duì)照中驗(yàn)證。 結(jié)果：在2名POAG患者中發(fā)現(xiàn)了2種不同的錯(cuò)義突變：新突變L89Q、已報(bào)道突變R390H。上述兩名患者中一名患者攜帶雜合突變(R390H／wt)，另一名患者攜帶復(fù)