重慶忠縣李氏原發(fā)性開角型青光眼家系致病基因的定位研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文重慶忠縣李氏原發(fā)性開角型青光眼家系致病基因的定位研究姓名：劉莛申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：賀翔鴿20071101第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文主要結(jié)果和結(jié)論如下：1重慶忠縣李氏POAG家系的遺傳方式屬于常染色體顯性遺傳，共7代50余人，現(xiàn)存4代34人，截至2006年2月有POAG患者11例，男8例，女3例。該家系患者發(fā)病年齡均≤40歲(男性平均265歲，女性平均327歲)，且發(fā)病時IOP高(發(fā)病時均感眼脹痛

2、難忍，多伴隨“虹視”現(xiàn)象，有條件測量IOP者均21mmHg)，視神經(jīng)嚴(yán)重?fù)p害(視盤垂直C／D多接近1O)，視功能重度喪失(多表現(xiàn)為晚期青光眼視野缺損和視覺電生理檢查異常)，是一個遺傳關(guān)系明確、患者人數(shù)較多、表型特征突出、同代子女較多的大型POAG家系。2用EBV轉(zhuǎn)化加CsA法對李氏家系34位成員的B淋巴細(xì)胞進行永生細(xì)胞株的建立與保存，建株成功率為912％(31株)，復(fù)蘇成功率為871％(27株)，復(fù)蘇失敗的4株均源自高齡個體。實驗結(jié)果顯

3、示該建株方法操作簡單，結(jié)果可信，成功率高，有效保存了該家系的遺傳資源。3獲得李氏家系34位成員的gDNA：源自永生細(xì)胞株11例、外周血20例、唾液3例。經(jīng)質(zhì)量評定，所提gDNA的質(zhì)量均能滿足后續(xù)研究的要求。采用候選位點克隆策略結(jié)合連鎖分析，選擇與青光眼發(fā)病相關(guān)的代表MyDC、DP7Ⅳ、WrD尺36和CyP』BJ的8個STRmarker進行篩查定位。結(jié)果顯示：位于CyPJfBJ附近的D2S367和D2S2259的兩點最大LOD值具有顯著意

4、義，特別是D2S2259，不論是LOD值(2135)還是重組率O(O06)，都已達(dá)到Lander和心uglyak于1995年提出的標(biāo)準(zhǔn)(LOD≥21，0O10)，提示D2S2259與李氏家系的致病基因連鎖；這一結(jié)果也排除了該家系與M陽C(1q21q31)、DP州10p15一p14)和WrDR36(5q221)三個基因連鎖的可能性。4對34位李氏家系成員和30例正常對照進行C沖J曰J編碼區(qū)域的測序，在李氏家系的5例患者和1例正常一級親屬中

5、發(fā)現(xiàn)342G／C、441G／A、494G／C、1720C／A、1933G／C、2087G／A和2198—2199CTdel共7處雜合突變，其余患者或親屬未檢測到任何突變。來自同一地區(qū)的正常對照未發(fā)現(xiàn)上述任何突變。該家系CyP』曰Jf編碼區(qū)域的突變頻率為1765％，患者為4545％，正常一級親屬為435％。測序結(jié)果表明C即JB』編碼區(qū)域的突變與李氏家系發(fā)病相關(guān)，但并非直接導(dǎo)致該家系連續(xù)多代發(fā)病的真正原因。5通過加密D2S2259連鎖區(qū)域的