原發(fā)性開角型青光眼大家系致病基因篩查研究.pdf

1、目的：探討小梁網(wǎng)糖皮質(zhì)激素誘導反應(yīng)蛋白（MYOC）基因、視神經(jīng)病變誘導反應(yīng)蛋白（OPTN）基因、細胞色素P450超家族1亞家族（CYP1B1）基因、T細胞激動WD重復蛋白（WDR36）基因與原發(fā)性開角型青光眼（POAG）家系發(fā)病的關(guān)系。
　　對象：收集一個包括4代共47人的POAG家系，其中11人確診為POAG，余36人為正常人。POAG患者中，4位已經(jīng)接受雙眼抗青眼手術(shù)，1位接受左眼抗青光眼手術(shù)，術(shù)后眼壓均控制良好。共采集到31

2、份血樣，其中7人為POAG患者，余24人為正常人。
　　方法：⑴4代31人進行嚴格眼科檢查，各抽取外周血10ml；⑵使用Wizard Genomic DNA Purification試劑盒提取和純化31位家系成員的外周靜脈血基因組DNA；⑶根據(jù)已知青光眼致病基因MYOC和CYP1B1的DNA序列，設(shè)計和合成相應(yīng)的PCR引物6對，抽取家系中的一位POAG患者Ⅱ:14，將Ⅱ:14基因組DNA做為模板，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)擴增MY

3、OC和CYP1B1基因的編碼外顯子及剪切連接區(qū)域；⑷將PCR產(chǎn)物純化并進行正向和反向DNA測序；⑸對于POAG其他的兩個候選基因OPTN和WDR36，選擇位于基因兩側(cè)短串聯(lián)重復序列（STR）為分子遺傳學標記，設(shè)計4對STR引物，擴增相應(yīng)的DNA序列，進行STR分型分析和單體型構(gòu)建，以排查該家系患者的致病性是否與這兩個候選基因相關(guān)。
　　結(jié)果：DNA常規(guī)測序分析顯示該家系患者不存在MYOC和CYP1B1基因編碼區(qū)和剪切位點致病性突變