左心耳組織內(nèi)炎癥介質(zhì)與風(fēng)心病合并房顫的相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的： 心房顫動(dòng)(房顫，atrialfibrillation，AF)是臨床常見的一種心律失常，易引起血流動(dòng)力學(xué)異常和體循環(huán)動(dòng)脈栓塞，導(dǎo)致患者致殘、致死。近年來(lái)，對(duì)房顫的研究已成為熱點(diǎn)。但迄今為止，房顫的發(fā)病機(jī)制仍不完全清楚，治療方法和效果不理想。左心房是房顫發(fā)生的始動(dòng)部位，房顫時(shí)左心房組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變的程度，左心房組織細(xì)胞內(nèi)炎癥介質(zhì)的含量變化及其與左心房組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變程度的相關(guān)性等，應(yīng)更能精確說(shuō)明心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)與房顫的關(guān)系

2、，炎癥介質(zhì)與心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)及房顫的關(guān)系。有關(guān)這些方面的研究鮮見報(bào)道。 本文設(shè)計(jì)選擇全部是中、重度的風(fēng)濕性心臟病二尖瓣病變患者，根據(jù)患者是否合并房顫將其分為兩組，同期選擇意外死亡的正常人作為對(duì)照組。觀察患者左心房組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變；檢測(cè)患者左心房組織細(xì)胞內(nèi)炎癥介質(zhì)含量的變化，比較分析患者左心房組織細(xì)胞內(nèi)炎癥介質(zhì)含量與左心房組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變程度的相關(guān)性。同時(shí)檢測(cè)比較房顫組、竇性心律組患者血清炎癥介質(zhì)水平。這樣可以排除風(fēng)濕、二尖瓣病變等

3、混雜因素的影響，從而進(jìn)一步探討炎癥與心房重構(gòu)、房顫的關(guān)系。 方法： 1.病人選擇與分組： 1.1病人選擇標(biāo)準(zhǔn)：中、重度風(fēng)濕性心臟病二尖瓣病變患者，年齡30～65歲，心功能NYHAII～Ⅲ級(jí)。擬行單純二尖瓣置換手術(shù)。 1.2病人排除標(biāo)準(zhǔn)：下列情況均予以排除： ①臨床有風(fēng)濕活動(dòng)征象； ②合并感染性心內(nèi)膜炎； ③合并腫瘤； ④甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)； ⑤肝、腎功能異常及其他器官功

4、能不全； ⑥全身任何部位有急慢炎癥性疾??； ⑦合并周圍血管性疾病或.栓塞性疾??； ⑧AF持續(xù)時(shí)間小于6個(gè)月。 1.3課題設(shè)計(jì)分組：選擇擬行二尖瓣置換手術(shù)患者20例，年齡31～63(50.25±10.42)歲，心功能NYHAII～Ⅲ級(jí)。所有患者術(shù)前均常規(guī)行血常規(guī)、血液生化、胸片、心電圖、超聲心動(dòng)圖檢查。 2.左心耳肌組織樣本采集：在體外循環(huán)轉(zhuǎn)流前，結(jié)扎左心耳并切取部分左心耳組織。 3.左心耳

5、組織病理學(xué)檢測(cè)：標(biāo)本以10％中性甲醛溶液固定，經(jīng)脫水、浸蠟后石蠟包埋。包埋石蠟塊常規(guī)5μm連續(xù)切片，撈片，60℃烤箱干燥。常規(guī)H-E染色、Masson三色染色。 4.左心耳組織內(nèi)炎癥介質(zhì)檢測(cè) 4.1免疫組織化學(xué)SABC法：即稀釋后的一抗與特異性抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物 ，再依次與生物素化二抗及鏈霉親和素過(guò)氧化物酶組成的復(fù)合物結(jié)合， 4.2Westernblotting法：稱取-80℃保存的左心耳組織100mg，

6、剪碎研磨，測(cè)定蛋白質(zhì)含量；然后制備SDS-聚丙烯酸胺凝膠電泳樣本制備， 5.外周血清標(biāo)本的制備與檢測(cè)：所有對(duì)象于術(shù)前一日清晨空腹臥位抽取肘正中靜脈血6ml，4℃3000rpm離心15分鐘，分離血清后分別注入3個(gè)標(biāo)本儲(chǔ)存管， 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，多組間均數(shù)比較采用方差分析、兩組之間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)， 結(jié)果： 1.房顫組患者和竇性心律組患者的性別、年齡、左室射血分

7、數(shù)和心功能分級(jí)(NYHA)等相比，兩組患者的性別、年齡、左室射血分?jǐn)?shù)和心功能分級(jí)無(wú)顯著差異(P>0.05)： 2.房顫組患者和竇性心律組患者的左心耳心肌細(xì)胞直徑均增大，兩組與正常對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)； 3.房顫組患者左心耳間質(zhì)纖維組織增生，其與竇性心律組和正常對(duì)照組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)； 4.房顫組患者與竇性心律組患者外周血白細(xì)胞比較：兩組外周血白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)和中性

8、粒細(xì)胞百分比(NEU)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 5.與竇性心律組患者相比，房顫組外周血炎癥介質(zhì)CRP、IL-6、TNF-α水平未增高，兩組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這與房顫組左心耳組織內(nèi)炎癥介質(zhì)含量升高不相平行。 6.免疫組化染色及其(IOD)值：正常對(duì)照組左心耳組織內(nèi)幾乎未見到ClIP、IL-6、TNF-α染色顆粒；竇性心律組患者左心耳組織內(nèi)可見到較多CRP、IL-6、TNF-α染色顆粒；

9、 7.Westernblotting檢測(cè)及其(IOD)值：房顫組左心耳組織內(nèi)CRP、IL-6、TNF-α表達(dá)高于竇性心律組及正常對(duì)照組，房顫組與竇性心律組、正常對(duì)照組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 8.炎癥介質(zhì)與左心耳組織結(jié)構(gòu)改變的相關(guān)性分析：免疫組化法檢測(cè)的左心耳組織內(nèi)炎癥介質(zhì)CRP、IL-6、TNF-αIOD值與左心耳心肌細(xì)胞直徑呈正相關(guān) 結(jié)論： 1.心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)與房顫的發(fā)生和維持密切相關(guān)，

10、風(fēng)濕性心臟病二尖瓣病變合并房顫時(shí)心房重構(gòu)的主要特征性改變是：心房心肌細(xì)胞肥大、心房組織間質(zhì)纖維化。 2.風(fēng)濕性心臟病二尖瓣病變合并房顫時(shí)，病人左心房擴(kuò)大主要與其自身二尖瓣病變引起的血流動(dòng)力學(xué)改變有關(guān)，可能與房顫的維持相關(guān)而與房顫的發(fā)生關(guān)系不密切。 3.風(fēng)濕性心臟病二尖瓣病變患者左心房組織發(fā)生“類結(jié)構(gòu)重構(gòu)樣”改變，可能是二尖瓣病變易發(fā)生房顫的病理基礎(chǔ)。合并房顫的患者，其左心房肌細(xì)胞增大明顯，是左心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的主要改變，其細(xì)

11、胞明顯增大的機(jī)理有待進(jìn)一步研究。 4.風(fēng)濕性心臟病二尖瓣病變可發(fā)生左心房擴(kuò)大，左心房心肌細(xì)胞肥大，但其不能引起左心房心肌間質(zhì)纖維化，左心房心肌間質(zhì)纖維化是房顫、心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)的獨(dú)特改變。說(shuō)明左心房心肌間質(zhì)纖維化與房顫關(guān)系更為密切。因此，對(duì)心房間質(zhì)纖維化的發(fā)生機(jī)制及其與房顫的因果關(guān)系應(yīng)進(jìn)一步研究。 5.房顫病人左心房組織內(nèi)內(nèi)炎癥介質(zhì)含量明顯升高，進(jìn)一步證實(shí)了炎癥與房顫密切相關(guān)。 6.房顫時(shí)左心房組織水平發(fā)生以左心房心

12、肌細(xì)胞肥大和間質(zhì)纖維化為主要特征的心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)；左心房心肌細(xì)胞肥大程度和間質(zhì)纖維化程度與左心房組織內(nèi)炎癥介質(zhì)含量呈正相關(guān)。說(shuō)明炎癥與心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)密切相關(guān)，提示炎癥通過(guò)影響心房重構(gòu)而參與房顫的發(fā)生和維持。 7.房顫時(shí)血清CRP、IL-6、TNF-α水平無(wú)明顯升高，說(shuō)明房顫時(shí)，患者機(jī)體可能保持于低水平炎癥狀態(tài)，房顫的發(fā)生、維持與機(jī)體整體炎癥狀態(tài)水平的高低無(wú)關(guān)，而與心肌局部的炎癥狀態(tài)有關(guān)。 8.房顫時(shí)血清CRP、IL-6、TN