小麥莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)轉(zhuǎn)化技術(shù)研究.pdf

1、小麥的轉(zhuǎn)基因，雖然有了不少成功的報(bào)道，但依然被學(xué)術(shù)界公認(rèn)為是植物轉(zhuǎn)基因研究中比較困難的領(lǐng)域，其操作復(fù)雜、穩(wěn)定性差、實(shí)用性差是目前小麥轉(zhuǎn)基因技術(shù)中存在的主要問(wèn)題。本研究以建立易操作、不依賴(lài)組織培養(yǎng)的小麥轉(zhuǎn)基因技術(shù)為目標(biāo)，以石4185為材料，較系統(tǒng)地探討了以小麥莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)為受體的基因槍轉(zhuǎn)化法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法，取得了如下主要研究結(jié)果: (1)初步建立了基因槍法轉(zhuǎn)化小麥莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)技術(shù)體系。具體包括:掰芽法制備受體、用1100Psi+9

2、cm的參數(shù)組合進(jìn)行轟擊等。對(duì)轟擊后的小麥莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)(70個(gè)×3批)進(jìn)行GUS瞬時(shí)表達(dá)檢測(cè)，結(jié)果為:以受體數(shù)統(tǒng)計(jì)時(shí)，轉(zhuǎn)化率為22.9～35.7％；以生長(zhǎng)點(diǎn)數(shù)統(tǒng)計(jì)時(shí)，轉(zhuǎn)化率為5.7～8.6％。用含badh/bar的pABH9質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，獲得了802個(gè)T0植株，對(duì)其穗行進(jìn)行PPT。抗性篩選，獲得了105個(gè)抗性株，來(lái)源42個(gè)T0株，抗性率為5.2％。用PCR檢測(cè)T1植株，6個(gè)呈陽(yáng)性。 (2)初步建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化小麥生長(zhǎng)點(diǎn)技術(shù)體系。借助

3、此體系，利用農(nóng)桿菌C58菌株對(duì)小麥莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)進(jìn)行了BADH基因的轉(zhuǎn)化，獲得221個(gè)T0植株。接種T0植株所結(jié)的幼胚(T1)于含卡那霉素的PM培養(yǎng)基上進(jìn)行抗性篩選，獲得23個(gè)抗性株，來(lái)源于6個(gè)T0代單株，抗性率為2％。對(duì)T1植株進(jìn)行PCR檢測(cè)，2個(gè)呈陽(yáng)性。 (3)研制出了一種適于刺傷生長(zhǎng)點(diǎn)細(xì)胞的不銹鋼刷。此鋼刷單絲直徑小(4～8μm)、每個(gè)刷面可形成數(shù)百個(gè)刺傷小孔。特別是8μm的鋼刷剛性強(qiáng)、耐用性好，可以有效地對(duì)小麥莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)造成