4-羥基喹啉-3-羧酰胺類似物的免疫活性篩選及H1521對實驗性自身免疫性腎炎的治療作用及機理研究.pdf

1、Linomide(roquinimex，LS2616)是由瑞典AB LEO制藥公司開發(fā)一種Th1/Th2平衡調(diào)節(jié)劑，對多種自身免疫病的動物模型均有較好的治療作用。Linomide在美國作為治療多發(fā)性硬化癥的在研新藥(investigational new drug，IND)曾進入Ⅲ期臨床試驗，但由于發(fā)現(xiàn)較為嚴重的心臟毒性被提前終止。但是，多家實驗室仍在對linomide進行結(jié)構(gòu)改造以期發(fā)現(xiàn)高效低毒的新型免疫調(diào)節(jié)劑。本實驗室亦與化學合成實

2、驗室合作，由惲榴紅研究員領(lǐng)導的研究小組負責linomide的結(jié)構(gòu)改造、樣品合成，得到一系列4-羥基喹啉-3-羧酰胺類似物，并對所獲得化合物進行免疫活性篩選和評價。 一、4-羥基喹啉-3-羧酰胺類似物的活性篩選 針對linomide的作用特點，并考慮到其毒性因素，首先采用小鼠淋巴細胞增殖反應在體外對linomide類似物進行免疫活性初篩。Linomide類似物共計接入124個，由于溶解度的原因，共對其中86個化合物進行了免

3、疫活性初篩。結(jié)果表明，86個化合物中有38個作用與linomide相似，體外應用具有免疫抑制活性。進而，采用MTT法對上述38個化合物對小鼠脾淋巴細胞的毒性作用進行了初篩。結(jié)果表明，H1521、H0418、H0215、H1619、H0216、H1921、H0715等七個化合物在1～100μg/ml濃度范圍內(nèi)對小鼠脾淋巴細胞無明顯毒性作用或毒性低于linomide o在此基礎(chǔ)上，進一步觀察了H1521等七個化合物對小鼠遲發(fā)性超敏反應(de

4、layed typehypersensitivity，DTH)的影響。結(jié)果表明，化合物H1521和H0418的作用與linomide相似，明顯增強小鼠DTH；化合物H0215、H0216、H1619和H0715對小鼠DTH則無明顯影響。同時，檢測了小鼠脾細胞培養(yǎng)上清Th1/Th2細胞因子的水平，結(jié)果表明，H1521和H0418能顯著增加Th1細胞因子IFN-γ分泌，對Th2細胞因子IL-4分泌無明顯影響，提示H1521和H0418能調(diào)節(jié)

5、Th1/Th2平衡，具有較好的開發(fā)前景。因此，在后續(xù)的實驗中，我們選擇化合物H1521，對其抗自身免疫性腎炎的活性進行了評價，并對其作用機理進行了初步探討。 二、H1521對小鼠實驗性自身免疫性腎炎的療效評價 本研究選用的小鼠自身免疫性腎炎模型是一種慢性移植物抗宿主病(chronicgraft-versus-host disease，cGVHD)病理模型，該模型具有與人類SLE相似的病理生理學變化和臨床表現(xiàn)，如Th1/T

6、h2細胞失衡，B細胞異?；罨a(chǎn)生自身抗體，免疫復合物沉積介導血管球性腎炎，因此常被用于自身免疫性腎炎發(fā)病機理、防治藥物及藥物作用機理的研究。 三、H1521對自身免疫性腎炎小鼠治療作用的機理研究 在確定H1521對小鼠自身免疫性腎炎療效的基礎(chǔ)上，針對腎炎發(fā)生發(fā)展的主要病理生理學環(huán)節(jié)及關(guān)鍵分子，觀察了H1521對Th1/Th2細胞平衡、B細胞活化、巨噬細胞活化、性激素水平等方面的影響，旨在探討H1521防治自身免疫性。腎炎