Y27等化合物免疫活性評價及治療自身免疫性腎炎的藥效學研究.pdf

1、本室經多年研究發(fā)現4-羥基喹啉-3-羧酰胺類化合物對小鼠實驗性自身免疫性腎炎具有良好的治療作用。H1521能降低實驗性自身免疫性腎炎小鼠的尿蛋白,改善血清肌酐等生化指標的異常,并能明顯減輕模型小鼠腎臟組織病理學損害程度,表明H1521對小鼠實驗性自身免疫性腎炎具有明顯治療作用?；衔镌缙谒幋鷦恿W特性預測結果顯示,H1521經口給藥后能在血液內檢測到原形化合物,其血藥濃度在給藥2 h達高峰。H1521溶解度高,小鼠灌胃給予H1521后L

2、D50約為1.65 g/kg,約為其治療自身免疫性腎炎有效劑量的50倍。但是,H1521作為候選化合物存在的主要問題在于其為一手性分子,其對映異構體的不對稱合成過程復雜,步驟多,得率低,難以進行大規(guī)模的活性評價,更難以滿足工業(yè)化生產的需求。
　　為了解決上述問題,嘗試對H1521進行結構改造以去除其原有的手性中心,并在保證較好的免疫活性的基礎上,進一步改進溶解性,改善其成藥性,從而為進一步的臨床前研究打下厚實的基礎。
　　一

3、、Y27等新結構化合物免疫活性篩選。
　　以本室前期建立的篩選體系為基礎,分別采用小鼠淋巴細胞增殖反應、MTT法和染料排斥法對經結構改造合成化合物的免疫活性及淋巴細胞毒性進行了初步篩選。共計接入化合物39個,由于溶解度的原因,對其中35個化合物進行了免疫活性初篩,發(fā)現Y27、Y30、Y32、Y05、Y06、Y07、Y23、Y25等八個化合物在體外表現出較強的免疫抑制活性;而淋巴細胞毒性篩選結果顯示,八個化合物中只有Y27、Y32、

4、Y07、Y25無明顯淋巴細胞毒性,提示Y27、Y32、Y07、Y25的免疫抑制活性并非藥物對細胞的直接細胞毒作用引起。因此,本研究對Y27、Y32、Y07、Y25體內外免疫抑制活性進行進一步評價。
　　二、Y27等化合物免疫活性初步評價。
　　在體外觀察了Y27、Y32、Y07、Y25四個化合物對T、B淋巴細胞以及巨噬細胞活性的影響,發(fā)現四個化合物對T、B淋巴細胞增殖均具有明顯抑制作用, Y27、Y32抑制作用稍強;Y07和

5、Y25對B淋巴細胞抗體分泌無明顯影響,Y27和Y32高濃度(100 mM)時對B淋巴細胞抗體分泌有一定抑制作用;Y27、Y32及Y25可以減少小鼠巨噬細胞系RAW264.7細胞TNF-a分泌。進而選用小鼠遲發(fā)型超敏反應(delayed type hypersensitivity, DTH)模型和雞卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏模型評價了化合物在整體動物水平的免疫藥理學活性。其中DTH是主要由CD4+T細胞介導的免疫反應,D

6、TH模型用于評價化合物對非特異性T細胞免疫應答的影響;OVA是T細胞特異性抗原,OVA致敏模型用于評價化合物對抗原特異性T細胞反應的影響。結果顯示Y07和Y25對T淋巴細胞介導的免疫反應有較強抑制作用,但對體液免疫無明顯影響,對抗原OVA介導的Th1/Th2細胞分化平衡也無明顯影響;Y27和Y32對細胞免疫和體液免疫都表現出較好的抑制活性,并對DTH模型小鼠Th1/Th2細胞失衡有一定的調節(jié)作用。根據以上結果我們認為Y27和Y32可能在

7、自身免疫性腎炎治療上有一定優(yōu)勢,因此本研究對這兩個化合物的抗自身免疫性腎炎活性進行了評價。
　　三、Y27和Y32對小鼠自身免疫性腎炎的療效評價。
　　小鼠狼瘡性腎炎模型包括誘導性和自發(fā)性兩類,本研究分別選用淋巴細胞免疫誘導的慢性移植物抗宿主病(chronic graft-vervus-host disease, cGVHD)病理模型和自發(fā)性腎炎模型MRL/lpr小鼠評價了化合物Y27和Y32對自身免疫性腎炎的治療作用。

8、r>　　實驗結果提示Y27和Y32對小鼠實驗性自身免疫性腎炎具有較好的治療作用。
　　四、Y27和Y32抗自身免疫性腎炎作用機理初步研究。
　　在確定Y27和Y32對小鼠自身免疫性腎炎療效后,本研究針對腎炎發(fā)生發(fā)展中的關鍵環(huán)節(jié),觀察了Y27和Y32對Treg功能、Th1/Th2細胞平衡、B淋巴細胞活化和巨噬細胞功能等方面的影響,對其治療自身免疫性腎炎的作用機理進行了初步探討。
　　綜合本部分研究結果可以看出，Y27和Y

9、32治療小鼠自身免疫性腎炎作用機理有相同之處，也有不同之處。相同之處在于二者均對腎炎小鼠的Thl/Th2失衡具有一定的調節(jié)作用;不同之處表現為Y27可通過增強Treg抑制功能發(fā)揮作用，Y32則可以通過影響B(tài)淋巴細胞的過度活化發(fā)揮作用。
　　通過以上研究，本論文主要得出以下結論:
　　1.對結構改造獲得的新結構化合物進行體外免疫活性和初步淋巴細胞毒性篩選的結果表明，Y27, Y32, Y07和Y2_5免疫抑制活性較強，且細胞毒

10、性較低;進一步進行體內免疫活性評價的結果表明，Y27和Y32免疫抑制活性較強，且二者對Thl/Th2平衡具有一定的調節(jié)作用，提示有較好的開發(fā)前景。
　　2.化合物Y27和Y32在cGVHD和MRL/lpr兩種實驗性自身免疫性腎炎小鼠上均能明顯降低其尿蛋白，改善血清尿素氮、肌醉等水平的異常，并減輕小鼠腎臟病理損害程度，提示對小鼠實驗性自身免疫性腎炎有良好治療作用。
　　3.Y27和Y32作用機制新穎，均可通過對腎炎小鼠的Th1