CD147胞外區(qū)的原核表達、復性及其溶液結構的初步研究.pdf

1、HAb18G／CD147屬于免疫球蛋白超家族的成員，是一種在機體中廣泛表達的單次跨膜的糖蛋白，參與生命活動中的許多生理過程，如腫瘤細胞的侵襲和轉移，淋巴細胞的遷移和活化，組織修復與重建，炎癥，Alzheimer’s病等，并且發(fā)揮著重要的生物學功能。而許多功能的發(fā)揮都依賴于它的胞外段(HAb18GEP)及其糖基化修飾。因此，對HAb18GEP進行空間結構方面的研究，從而闡明它與其它分子的相互作用機制，對了解它是如何發(fā)揮功能是十分必要的。<

2、br>　　核磁共振技術最主要的優(yōu)勢在于可以在原子分辨水平上給出溶液中生物大分子的結構、構象信息，尤其能夠簡便快捷地研究蛋白質(zhì)間相互作用，從而獲得生物大分子在有機體內(nèi)的實際情況。因此，我們采用NMR方法對HAb18GEP結構進行初步研究。由于HAb18GEP蛋白在原核系統(tǒng)中的表達主要是以包涵體形式存在的，本研究摸索了一套針對HAb18GEP的有效的體外復性方法，并成功地對其進行了復性。利用核磁共振技術對HAb18GEP及其兩個結構域進行了

3、結構方面的初步研究，完成了C80的主鏈指認，為下一步進行溶液結構的研究和蛋白質(zhì)相互作用的研究打下了良好的基礎。
　　本研究主要分為三個部分：
　?。ㄒ唬〩Ab18GEP在大腸桿菌中的表達、復性及穩(wěn)定性研究
　　優(yōu)化培養(yǎng)條件，實現(xiàn)了HAb18GEP的高效表達，獲得大量以包涵體形式存在的蛋白，并成功對蛋白進行了體外復性。應用NMR技術證明蛋白質(zhì)得到了很好的折疊。對蛋白質(zhì)進行了穩(wěn)定方面的研究，確認了蛋白質(zhì)降解產(chǎn)物為9.5kD

4、a的肽段，并且對蛋白樣品的溶液條件進行了優(yōu)化，改善了核磁共振實驗數(shù)據(jù)的質(zhì)量。
　?。ǘ〩Ab18GEP的C－結構域和N－結構域的表達、復性
　　根據(jù)HAb18GEP的二級結構預測及對其的穩(wěn)定性研究，分別對HAb18GEP的兩個結構域進行了克隆、表達。對其中的N90和C80蛋白進行了表達、體外復性、純化，NMR實驗證明得到了很好的折疊。
　　（三）C80蛋白的主鏈指認
　　對C80蛋白進行了同位素標記、表達、體外