HER-2-neu對雌激素依賴性子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞信號(hào)通路(MAPK-ERK、PI3K-Akt)調(diào)控的研究.pdf

1、目的：培養(yǎng)Ishikawa細(xì)胞株及轉(zhuǎn)染HER-2/neu的Ishikawa細(xì)胞株,探討HER-2/neu對雌激素依賴性子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞信號(hào)通路(MAPK/ERK、PI3K/Akt)調(diào)控的研究。
　　 方法：
　　 1、應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)對子宮內(nèi)膜腺癌Ishikawa細(xì)胞株及轉(zhuǎn)染HER-2/neu的Ishikawa細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)；
　　 2、表皮生長因子(Endothelial Growth Factor)處理Ishik

2、awa細(xì)胞株及轉(zhuǎn)染HER-2/neu的Ishikawa細(xì)胞株,Western-blot檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞前后COX-2的表達(dá)；t-Akt及p-Akt蛋白;t-ERK及p-ERK。ELISA方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中雌二醇的含量；
　　 3、用PI3 K/Akt的抑制劑LY294002抑制信號(hào)通路,以不同時(shí)間(濃度為20umol/L時(shí),分別作用10 min、20 min、30 min和60 min)和不同濃度(5 umol/L、10 um

3、ol/L、20 umol/L和40 umol/L)作用后30 min后,Western-blot檢測COX-2的表達(dá)水平、ELISA檢測雌二醇水平。用MAPK/ERK的抑制劑PD98059抑制信號(hào)通路,以不同時(shí)間(濃度為50 umol/L時(shí),分別作用10 min、20 min、30 min和60 min)和不同濃度(5 umol/L、10 umol/L、50 umol/L和100 umol/L)作用30min后,Western-blot

4、檢測COX-2的表達(dá)水平、ELISA檢測雌二醇水平；
　　 4、用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,并結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析HER-2/neu對MAPK/ERK、PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)控的作用進(jìn)行分析,以探討HER-2/neu與雌激素依賴性子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:
　　 1、轉(zhuǎn)染HER-2/neu的Ishikawa細(xì)胞株COX-2蛋白、p-Akt蛋白、p-ERK及細(xì)胞上清液中的雌二醇的含量均高于正常的I

5、shikawa細(xì)胞株(P＜0.05)；
　　 2、應(yīng)用抑制劑分別抑制上述兩種通路,轉(zhuǎn)染HER-2/neu的Ishikawa細(xì)胞株中COX-2的表達(dá)水平低于轉(zhuǎn)染前Ishikawa細(xì)胞株,同時(shí)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞上清液中雌二醇的含量亦低于轉(zhuǎn)染前細(xì)胞,(P＜0.05)；隨藥物濃度的增加及作用時(shí)間的延長,兩組細(xì)胞COX-2及雌二醇的表達(dá)均逐漸減少,且抑制作用與濃度及作用時(shí)間呈負(fù)依賴關(guān)系。
　　 結(jié)論:子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株HER