46、XY DSD基因診斷流程的建立和46,XY女性-AIS-5α-RD2缺乏的基因診斷.pdf

1、背景：性發(fā)育異常(Disorders of sex development，DSD)是指先天性的染色體性別、性腺性別、解剖性別(即表型性別)異常，包含一系列難以分類、難以診斷的復(fù)雜性疾病。其中絕大多數(shù)是因遺傳物質(zhì)的改變所致。根據(jù)染色體核型不同，可以分為性染色體DSD、46，XXDSD和46，XY DSD。46，XY DSD的遺傳背景最為復(fù)雜，涉及的基因比46，XX DSD更多，目前已有20多種46，XYDSD的致病基因被克隆。在46，X

2、Y DSD中，腫瘤發(fā)生率最高的是46，XY女性，它涉及到X、Y染色體或常染色體上基因的突變，雖然這些患者一般不會有自身配子的后代，即無后代的患病風(fēng)險(xiǎn)，但患者發(fā)育不良的性腺顯著增加了腫瘤發(fā)生率(20％-50％)；最常見的是雄激素不敏感綜合征和5α-還原酶2型缺乏，遺傳方式分別為X連鎖隱性遺傳和常染色體隱性遺傳。性發(fā)育異常不同程度地影響患者的生殖功能，更重要的是可能誘發(fā)與性發(fā)育、性心理、性行為等相關(guān)的問題，造成心理、行為偏差，處理不當(dāng)可能成

3、為社會問題。所以，這些患者亟待診斷和處理。分子遺傳學(xué)診斷不僅是明確46，XY DSD診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，更重要的是指導(dǎo)治療和可以通過產(chǎn)前診斷達(dá)到防止攜帶者生育患兒之優(yōu)生目的。
　　 目的：本研究旨在對DSD這一系列疑難病癥之一即46，XY DSD建立可靠的分類和基因診斷流程。并針對下述三類46，XY DSD：46，XY女性、雄激素不敏感綜合征和5α-還原酶2型缺乏的臨床特征和致病基因各自不同的特點(diǎn)，主要使用分子生物學(xué)技術(shù)，建立準(zhǔn)確、快

4、速的基因診斷體系和流程，闡述表型與基因型之間的關(guān)聯(lián)性，為這些46，XYDSD患者提供基因診斷和產(chǎn)前診斷依據(jù)，以預(yù)防惡性腫瘤的發(fā)生和減少患兒的出生。
　　 方法：遺傳門診接診46，XY DSD患者，詳細(xì)了解患者各方面情況，根據(jù)體格檢查、核型分析、激素檢測、B超和影像檢查，甚至內(nèi)窺鏡、活檢的結(jié)果，排除性染色體DSD和46，XX DSD后，仔細(xì)分類，建立基因診斷流程。然后選取46，XY女性6個不相關(guān)家系，行SRY、DHH和NR5A1/

5、SF1共3個基因全部外顯子突變檢測；選取10例完全性雄激素不敏感綜合征患者(來自5個遺傳不相關(guān)家系)及其家系成員和66例散發(fā)46，XY DSD(可能為雄激素不敏感綜合征或其他類型DSD)，行AR基因全部外顯子突變檢測，包含AR基因2個三核苷酸串聯(lián)重復(fù)數(shù)檢測；選取46，XY DSD中臨床診斷尿道下裂和病歷記錄中不能排除尿道下裂患者共19人，行5α-還原酶2型缺乏致病基因SRD5A2全部外顯子突變檢測。對發(fā)現(xiàn)的新突變在100個遺傳不相關(guān)正常

6、人中進(jìn)行突變篩查。
　　 結(jié)果：(1)46，XY女性：在病人1中檢測到SRY基因點(diǎn)突變c.254T>C。病人2中檢測到SRY因點(diǎn)突變c.391C>T。病人3中檢測到NR5A1雜合突變c.740-787del(48)。上述三個突變均為新發(fā)。6個病人均沒有發(fā)現(xiàn)DHH雜合或純合突變。(2)完全性雄激素不敏感綜合征：家系1：患者1A、1B檢測到c.2547insA。家系4：患者4A、4B及4C檢測到點(diǎn)突變c.2522G>A。家系5：患者

7、5A和5B檢測到點(diǎn)突變c.2248A>G。上述三個家系的突變均為已知致病突變。家系3：患者3A檢測到c.2609T>C，為新發(fā)突變。家系4和家系5中檢測到共4個女性成員為致病基因攜帶者。66個46，XY DSD散發(fā)患者：患者29檢測到點(diǎn)突變c.1847G>A，患者38顯示(CAG)39，為脊髓延髓肌肉萎縮癥，均為已知致病突變；患者1檢測到點(diǎn)突變c.2465T>A，患者37檢測到點(diǎn)突變c.623G>A，此兩個突變均為新發(fā)。患者10檢測到一

8、個同義突變c.2673C>T。AR基因多態(tài)：檢測到多聚谷氨酰胺(CAG)n重復(fù)多態(tài)共75人(除去患者38為致病重復(fù))，存在9種等位基因，n=16-30，以n=22最多，占57.33％(43/75)；多聚甘氨酸片段(GGC)n，檢測共76人，74人為n=17，僅2人n=16；沒有檢測到AR基因另一個多態(tài)c.639G>A。(3)46，XY DSD有尿道下裂或可疑尿道下裂患者19人：患者11檢測到5αー還原酶2型缺乏致病基因SRD5A2點(diǎn)突變

9、c.578A>G，患者17檢測到SRD5A2點(diǎn)突變c.680G>A，均為已知致病突變。
　　 結(jié)論：(1)建立了檢測146，XY DSD的基因診斷標(biāo)準(zhǔn)化流程。(2)對三類重要的46，XY DSD：46，XY女性、雄激素不敏感綜合征和5α-還原酶2型缺乏的共5個相關(guān)基因進(jìn)行了基因診斷和AR基因家系成員女性攜帶者身份確認(rèn)，為患者及家庭提供了基因診斷和產(chǎn)前診斷依據(jù)，分析和研究了各個基因型與表型之間的關(guān)聯(lián)性和復(fù)雜性，并提供了AR多態(tài)的不