溫陽益心活血化痰法對心肌缺血再灌注損傷NF-κB信號轉(zhuǎn)導通路調(diào)控機制研究.pdf

1、近年來研究表明，心肌缺血再灌注損傷的主要機制之一是過度的炎癥反應，在心肌缺血再灌注損傷的過程中炎性細胞因子大量釋放并發(fā)揮重要的作用。而NF—κB信號轉(zhuǎn)導通路參與介導細胞增殖、炎癥、凋亡等多種生理過程，對于心肌缺血再灌注損傷的發(fā)生、發(fā)展具有關鍵作用。因此，本研究以心肌缺血再灌注損傷中炎癥反應過程為研究主線，NF—κB信號轉(zhuǎn)導通路為切入點，以溫陽益心活血化痰法為干預手段，從細胞及分子生物學水平揭示溫陽益心活血化痰法對心肌缺血再灌注損傷的抗炎

2、效應及作用靶點，為優(yōu)化治療方案，提高臨床療效提供實驗依據(jù)。
　　 目的：探討溫陽益心活血化痰法對心肌缺血再灌注后NF—κB信號轉(zhuǎn)導通路的干預作用，明確本法對心肌缺血再灌注炎癥損傷的具體作用靶點，闡明其抗炎作用機理。
　　 方法：通過結(jié)扎大鼠心臟左前降支動脈建立心肌缺血再灌注損傷動物模型，運用透射電鏡觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)改變；全自動分析儀連續(xù)監(jiān)測法檢測大鼠血清LDH—L、CK水平；免疫印跡(western—blot)法檢測

3、心肌NIK、IKKβ、IκBα蛋白表達；采用逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈式反應(RT—PCR)及免疫組化法檢測心肌NF—κ
　　 Bp65mRNA及蛋白表達；酶聯(lián)免疫吸試驗(EL，ISA)測定血清IL—1β、IL—6及IL—10的含量；利用免疫組化方法觀察心肌TNF—α和ICAM—1蛋白表達。
　　 結(jié)果：①溫陽益心活血化痰法指導下創(chuàng)立的溫心方可以顯著改善心肌超微結(jié)構(gòu)損傷，抑制LDH—L、CK的生成和釋放，降低再灌注后心律失常發(fā)生率

4、，對心肌缺血再灌注損傷有保護作用；②溫心方能夠抑制再灌注后心肌NIK、IKKβ表達，并同時上調(diào)IκBα蛋白表達，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01)；③溫心方能明顯抑制心肌NF—κBp65mRNA及蛋白表達，阻止其核移位，與模型組相比統(tǒng)計學有顯著性差異(P<0.01)；④溫心方能顯著降低NF—κB調(diào)控的下游炎性細胞因子IL—1β、IL—6及TNF—α、ICAM—1的含量，并促進抑炎因子IL—10的表達，各項指標與模型組相比均有顯著性