HMGB1對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用及信號(hào)傳導(dǎo)通路.pdf

1、背景：冠心病是一種發(fā)病率、死亡率和致殘率極高的常見病和多發(fā)病，嚴(yán)重威脅人類健康，已成為嚴(yán)重的社會(huì)公共衛(wèi)生問題之一。心肌缺血發(fā)生時(shí)，能夠及時(shí)、有效地恢復(fù)缺血心肌的血流灌注，是減少缺血心肌損傷和恢復(fù)心臟功能的重要措施之一，也是改善缺血性心臟病患者預(yù)后的關(guān)鍵。隨著對(duì)急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)患者進(jìn)行溶栓治療、急癥經(jīng)皮穿刺冠狀動(dòng)脈介入治療術(shù)(percutaneous coronary inte

2、rvention，PCI)、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)(coronary artery bypass grafting，CABG)和激光心肌血運(yùn)重建術(shù)等技術(shù)在臨床上的推廣應(yīng)用，使缺血心肌的血液灌注得以及時(shí)有效的恢復(fù)。大量基礎(chǔ)和臨床研究[1，2]證實(shí)，缺血心肌的再灌注本身也會(huì)誘發(fā)一系列新的病理生理變化，進(jìn)一步加重心肌組織細(xì)胞的損傷，出現(xiàn)再灌注心律失常、心肌舒縮功能障礙、代謝異常以及心肌超微結(jié)構(gòu)改變等，即發(fā)生心肌缺血再灌注損傷(myocardial

3、 ischemia reperfusion injury，MIRI)，直接影響患者的心臟功能和預(yù)后。心肌缺血再灌注(ischemic reperfusion，I/R)損傷是極其復(fù)雜的病理生理過程，即缺氧器官在恢復(fù)血流和氧輸送的情況下心肌損傷加劇的現(xiàn)象。在血液中氧氣和營(yíng)養(yǎng)缺乏的條件下，恢復(fù)血流灌注的結(jié)果就是通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)炎癥和氧化還原損傷而不是恢復(fù)器官的正常功能[3]。多種因素包括氧自由基損傷、ATP敏感性鉀通道、鈣離子負(fù)荷超載、能量代

4、謝障礙、細(xì)胞凋亡及血管內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)等參與了MIRI的病理生理過程。減輕缺血所致的心肌細(xì)胞死亡（壞死和凋亡）的最有效途徑就是恢復(fù)心肌的有效血流灌注，但再灌注本身可以導(dǎo)致心肌再灌注損傷。因此，明確MIRI的機(jī)制，對(duì)減輕或者消除MIRI具有重要的臨床意義。高遷移率族蛋白1(high mobility group protein box1，HMGB1)是一種古老的生物分子，由215個(gè)氨基酸殘基組成，其相對(duì)分子量為30KD。有3個(gè)獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域

5、（A盒、B盒、C盒），均由約80個(gè)氨基酸殘基組成，是結(jié)合DNA的功能結(jié)構(gòu)域，位于N端的A盒和B盒與DNA都有很高的親和力。A盒、B盒均帶有正電荷，而位于C端的C盒則完全帶負(fù)電荷;B盒同時(shí)也是HMGB1引起炎癥反應(yīng)的功能性結(jié)構(gòu)域。HMGB1在哺乳類之間具有99％的同源性，在進(jìn)化上具有高度保守的特點(diǎn)。研究表明:在正常生理狀態(tài)下，HMGB1表達(dá)于絕大多數(shù)的器官和組織，屬于非組蛋白的核蛋白。在生理狀態(tài)下，HMGB1位于生物體的細(xì)胞核內(nèi)，并參與某

6、些基因的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)及細(xì)胞分化的調(diào)控過程，但HMGB1本身不是基因的核轉(zhuǎn)錄因子。在正常生理情況下，HMGB1在細(xì)胞核內(nèi)與DNA的結(jié)合是松散的，但當(dāng)細(xì)胞遭受機(jī)械損傷或壞死的時(shí)候（而非細(xì)胞凋亡），HMGB1易于從受損的細(xì)胞核內(nèi)釋放到細(xì)胞外，繼而誘發(fā)炎癥反應(yīng)。因此，HMGB1被認(rèn)為是機(jī)體壞死細(xì)胞發(fā)出的內(nèi)源性的危險(xiǎn)信號(hào)。多種免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞在炎癥發(fā)生后可主動(dòng)分泌HMGB1，一些感染性刺激因子(如LPS)和非感染性刺激因子(如TNF-α、IL-

7、1β)均可刺激免疫細(xì)胞分泌HMGB1。近年來的研究表明:HMGB1能夠抑制衰竭心臟的心肌重構(gòu)，給予HMGB1治療可改善心功能、減少心肌梗死面積。與缺血再灌注組相比，給予外源性HMGB1進(jìn)行預(yù)適應(yīng)可使心肌酶LDH、CK、腫瘤壞死因子-α(timor necrosisfactor-α，TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)和梗死面積顯著降低[8]。亦有研究表明:機(jī)體內(nèi)源性的HMGB1可促進(jìn)心肌梗死大鼠心肌血管新

8、生和心功能的恢復(fù)。心肌梗死后給與外源性的HMGB1可通過心肌細(xì)胞再生使左室功能得到一定程度的恢復(fù);內(nèi)源性HMGB1在糖尿病大鼠缺血性血管再生過程中具有決定性作用，給予外源性HMGB1蛋白可通過VEGF依賴方式促進(jìn)糖尿病鼠缺血后肢側(cè)支循環(huán)的形成[9]。提示HMGB1可以減輕心室重構(gòu)、促進(jìn)心肌細(xì)胞再生，對(duì)缺血心肌具有保護(hù)作用，從而使心功能得到改善。但也有研究表明:HMGB1表達(dá)增加與阿霉素所致心肌細(xì)胞凋亡有關(guān)，應(yīng)用藥物(A-box)或從遺傳

9、角度阻止HMGB1表達(dá)能夠減輕阿霉素所致的心肌細(xì)胞凋亡和心功能不全[10]。心肌細(xì)胞源性HMGB1可通過JNK通路促進(jìn)I/R誘致的在體心肌細(xì)胞凋亡和體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞的缺氧復(fù)氧所致的細(xì)胞凋亡。此外，處于缺氧/復(fù)氧條件下的心肌細(xì)胞釋放的HMGB1參與心肌細(xì)胞TNF-α的生成，繼之HMGB1與其心肌上的Toll樣受體4(toll like receptor4，TLR4)結(jié)合，HMGB1與TNF-α通過活化JNK通路導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡[11]。上

10、述研究提示:HMGB1可參與藥物和I/R所致的心肌細(xì)胞凋亡，并促進(jìn)心功能的惡化。我們的研究表明:大鼠心肌I/R發(fā)生后，其心肌HMGB1蛋白表達(dá)明顯高于假手術(shù)組，而給辛伐他汀預(yù)處理后，I/R組大鼠心肌HMGB1表達(dá)明顯下降。臨床研究表明:不穩(wěn)定性心絞痛/非ST段抬高性心肌梗死(UA/NSTEMI)患者發(fā)病24小時(shí)內(nèi)，血清HMGB1升高。入院時(shí)血清HMGB1升高是UA/NSTEMI患者心血管原因死亡的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)[13]。我們的研究表明:A

11、MI患者入院時(shí)，血清HMGB1明顯高于不穩(wěn)定性心絞痛組和對(duì)照組，血清HMGB1含量與冠心病患者疾病嚴(yán)重程度正相關(guān)，HMGB1升高是AMI患者預(yù)后不良的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)之一[14]。我們應(yīng)用辛伐他汀對(duì)AMI大鼠進(jìn)行后適應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn)，在再灌注前靜脈給予辛伐他汀可以引起AMI大鼠心肌損傷標(biāo)志物和氧化應(yīng)激標(biāo)志物的下降、心肌梗死面積的減少;AMI可使大鼠心肌HMGB1的表達(dá)增加，辛伐他汀后適應(yīng)可以顯著降低大鼠心肌HMGB1的表達(dá)，并與劑量呈正相關(guān)，提

12、示降低HMGB1的比表達(dá)可對(duì)再灌注心肌產(chǎn)生保護(hù)作用。也有研究表明:HMGB1對(duì)大鼠心肌梗死的作用具有劑量依賴性，大劑量可使心功能惡化，小劑量可以改善心功能[7]。外源性HMGB1可能通過TGF-β/SMDA信號(hào)通路防止心肌梗死后心肌發(fā)生不良重構(gòu)[16]?？傊壳皩?duì)外源性HMGB1對(duì)缺血心肌的作用尚無定論。磷脂酰肌醇-3-激酶/絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶(Phosphoinositide3-kinase/protein kinase B，P

13、I3K/Akt)通路是機(jī)體內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一。已證實(shí)P13K/Akt信號(hào)通路在細(xì)胞的存活、凋亡以及增殖等活動(dòng)中發(fā)揮重要的生物學(xué)功能[17]，激活P13K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路可以有效地阻止心肌細(xì)胞凋亡，保護(hù)心肌免受I/R損傷[18]。前期研究亦經(jīng)證實(shí)激活PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路可以調(diào)節(jié)HMGB1的表達(dá)[19]。PI3K/Akt信號(hào)通路參與了HMGB1預(yù)適應(yīng)對(duì)MIRI的保護(hù)作用[20]。已有研究證明:外源性HMGB1也可以通過TG

14、F-β/SMDA信號(hào)通路防止心肌梗死后心肌發(fā)生不良重構(gòu)。近期研究表明，抑制HMGB1表達(dá)可以減輕心肌I/R造成的心肌損傷和細(xì)胞壞死，但是給予外源性的HMGB1可以加重MIRI損傷[21]。因此，外源性HMGB1對(duì)I/R心肌的作用如何，調(diào)控其作用的信號(hào)傳導(dǎo)通路是什么，值得進(jìn)一步研究。前期的研究多在梗死心肌局部注射HMGB1，該途徑給藥需開胸創(chuàng)傷大，并發(fā)癥多，其研究結(jié)果不適于臨床研究借鑒，且其結(jié)果與靜脈注射是否存在差異等尚未明了。因此，本研

15、究擬構(gòu)建大鼠心肌I/R模型，經(jīng)靜脈給予HMGB1，探討靜脈HMGB1對(duì)I/R心肌的作用，并探討其信號(hào)傳導(dǎo)通路。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分: HMGB1對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用。
　　目的：通過構(gòu)建在體大鼠急性心肌I/R模型，觀察不同劑量的靜脈HMGB1對(duì)I/R大鼠心肌的作用。主要觀察:(1) HMGB1對(duì)IL-6、TNF-α和心臟肌鈣蛋白Ⅰ(cardiactropninⅠ，cTNI)等炎癥和心肌損傷標(biāo)志物的影響

16、;(2)觀察心肌組織丙二醛(malonaldehyde，MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)等氧化應(yīng)激產(chǎn)物的改變;(3)對(duì)心肌梗死面積和心肌細(xì)胞凋亡率的影響，以探討不同劑量的HMGB1對(duì)大鼠MIRI損傷的作用。
　　方法：取雄性Wistar大鼠(體重250g-300g)，隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham，n=15)、缺血再灌注組(I/R，n=15)、I/R+HMGB50組(HMGB50，50ng/

17、kg，n=15)、I/R+HMGB100組(HMGB100,100ng/kg, n=15)、I/R+HMGB200(組HMGB200,200ng/kg，n=15)共5組。I/R+HMGB1各組結(jié)扎心臟冠脈前降支(left anteriordescending，LAD)30min后，再灌注4h，分別按照HMGB150ng/kg、100ng/kg和200ng/kg的劑量溶于0.5ml生理鹽水中，于再灌注前10min經(jīng)尾靜脈注射。Sham組只

18、放置結(jié)扎線，不結(jié)扎LAD血管。
　　結(jié)果：⑴結(jié)扎LAD30min后，心動(dòng)圖ST段弓背上抬，提示LAD結(jié)扎成功[圖1(b)]所示。松開結(jié)扎線，恢復(fù)LAD再灌注后，出現(xiàn)室性心律失常，即再灌注心律失常[圖1(c)]所示。I/R組大鼠中共有8只(53.3％)發(fā)生室性早搏，2只發(fā)生心室顫動(dòng)（未完成實(shí)驗(yàn)，剔除未統(tǒng)計(jì)）。HMGB1干預(yù)各組室性心律失常的發(fā)生率下降(p＜0.05):HMGB50組7只(46.7％)出現(xiàn)室性早搏，1只發(fā)生心室顫動(dòng);H

19、MGB100組6只(40.0％)，2只發(fā)生心室顫動(dòng);HMGB200組6只(40.0％)，1只發(fā)生心室顫動(dòng)。所有發(fā)生心室顫動(dòng)的大鼠均死亡，未列入研究統(tǒng)計(jì)，最后各組完成實(shí)驗(yàn)的各組大鼠均為15只。表明HMGB1干預(yù)可以減少I/R大鼠室性心律失常的發(fā)生(p＜0.05)。⑵I/R組血清IL-6(377.46±16.86/166.87±15.45pg/ml)、TNF-α(77.23±1.01/16.68±2.57 pg/ml)、cTnⅠ(78.46

20、±8.6/0.13±0.12 ug/l)和心肌MDA含量顯著高于sham組(8.59±0.71/1.48±0.17nmol/mg，均p＜0.01);心肌SOD活性明顯低于sham組(71.33±5.81/140.77±10.55 u/mg，p＜0.01)。與I/R組比較， HMGB50、HMGB100和HMGB200各組血清IL-6(296.97±24.08、271.05±16.94和227.62±16.22 pg/ml，均p＜0.01

21、)、TNF-α(58.62±5.83、52.69±6.74和45.7±8.71 pg/ml，均p＜0.01)、cTnⅠ(66.26±6.87、58.74±7.05和52.40±6.70μg/l，均p＜0.01)和心肌MDA(6.81±1.43、5.50±0.88和3.88±1.12 nmol/mg，均p＜0.01)含量顯著降低，心肌SOD含量（83.47±5.75、92.55±6.01和117.26±10.31 u/mg，均p＜0.01

22、）明顯升高，并呈劑量依賴性。⑶與I/R組[（56.30±4.47）％]比較，HMGB50、HMGB100和HMGB200各組心肌梗死面積[（45.80±4.37）％、(40.60±5.04)％和（34.10±5.99）％，均p＜0.01]明顯降低。⑷I/R組心肌纖維紊亂，梗死區(qū)心肌細(xì)胞核溶解。各HMGB1處理組上述改變明顯減輕，劑量越大，改變?cè)捷p微。⑸I/R組心肌細(xì)胞凋亡率顯著高于sham組[（29.09±2.41）％/（5.43±1.

23、58）％，p＜0.01]。與I/R組相比，HMGB50、HMGB100和HMGB200各組心肌細(xì)胞凋亡率[（29.09±2.41）％/(24.90±4.43)％、(16.04±1.99)％和(13.39±1.64)％，均p＜0.01]下降，HMGB1劑量越高，細(xì)胞凋亡率越低。
　　結(jié)論：①心肌缺血再灌注損傷表現(xiàn)為心肌細(xì)胞嚴(yán)重壞死，心肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂，炎性細(xì)胞浸潤(rùn);血清IL-6、TNF-α和c-TnⅠ等心肌炎癥和損傷標(biāo)志物升高;心肌M

24、DA含量升高和SOD含量下降等氧化應(yīng)激產(chǎn)物變化。②HMGB1可以減輕心肌缺血再灌注損傷，對(duì)心肌產(chǎn)生保護(hù)作用。抑制炎癥反應(yīng)和減輕氧化應(yīng)激、抑制心肌細(xì)胞凋亡，可能是HMGB1減少心肌梗死面積，對(duì)缺血再灌注心肌損傷保護(hù)的作用機(jī)制之一。
　　第二部分：PI3K/Akt信號(hào)通路介導(dǎo)HMGB1對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)的調(diào)控機(jī)制。
　　目的：構(gòu)建在體大鼠急性心肌I/R模型，觀察靜脈注射HMGB1對(duì)心肌I/R大鼠血清IL-6、TNF-α

25、、c-TnⅠ和心肌組織MDA含量、SOD活性及其心肌梗死面積的影響。探討靜脈HMGB1對(duì)大鼠再灌注心肌的保護(hù)作用，并應(yīng)用PI3K抑制劑渥曼青霉素(Wortmannin)，探討PI3K/Akt信號(hào)通路介導(dǎo)HMGB1保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的調(diào)控作用及其機(jī)制。
　　方法：取雄性Wistar大鼠(體重250g-300g)，隨機(jī)分為五組，即假手術(shù)組(Sham，n=20)、缺血再灌注組(I/R，n=20)、I/R+HMGB200組(n=20)

26、、I/R+ Wortmannin組(I/R+Wortmannin,n=20)、I/R+HMGB200+Wortmannin組(I/R+HMGB200+ Wortmannin，n=20)。I/R+HMGB200組:結(jié)扎LAD30min，再灌注4h; HMGB1(200ng/kg)溶于0.5ml生理鹽水中，分別于再灌注前10min注射HMGB1和15min尾靜脈注射0.5ml生理鹽水;I/R+Wortmannin組:結(jié)扎LAD30min，再

27、灌注4h，渥曼青霉素(20μg/kg)溶于0.5ml二甲基亞砜中，再灌注前10min和15min分別尾靜脈注射0.5ml生理鹽水和渥曼青霉素;I/R+HMGB200+Wortmannin組:結(jié)扎LAD30min，再灌注4h。HMGB1(200ng/kg)和渥曼青霉素（20μg/kg）分別溶于0.5ml生理鹽水和二甲基亞砜中，分別于再灌注前10min和15min尾靜脈注射。
　　結(jié)果：⑴各組血清IL-6、TNF-α、cTNI和心肌組

28、織MDA含量和SOD活性的比較:如表1(a-e)和圖(1-5)所示，I/R組、I/R+HMGB200組、I/R+Wortmannin組和I/R+HMGB200+Wortmannin組血清IL-6(377.46±16.86 pg/ml,227.62±16.22 pg/ml,363.45±11.59 pg/ml and363.28±11.42 pg/ml)、 TNF-α(77.23±1.01 pg/ml,45.70±8.71 pg/ml,7

29、4.32±1.42 pg/ml and76.35±3.35 pg/ml)、 cTnⅠ(78.46±8.60 ng/ml,52.40±6.70 ng/ml,73.53±4.53ng/ml and77.58±6.24 ng/ml)和 MDA(8.59±0.71nmol/mg,3.88±1.12 nmol/mg,7.04±0.53 nmol/mg and9.04±0.42 nmol/mg)顯著高于Sham組，SOD含量降低(71.33±5.8

30、1 u/mg,117.26±10.31 u/mg,68.43±3.55u/mg and75.28±7.53 u/mg,均P＜0.01)。I/R組(377.46±16.86 pg/ml,77.23±1.0 pg/ml,78.46±8.60 ng/ml,8.59±0.71 nmol/mg)、I/R+Wortmannin組(363.45±11.53 pg/ml,74.32±1.42pg/ml,73.53±4.53ng/ml,7.04±0.53

31、 nmol/mg)和I/R+HMGB200+Wortmannin組(363.28±11.42 pg/ml,76.35±3.35 pg/ml,77.58±6.24 ng/ml,9.04±0.42 nmol/mg)血清IL-6、 TNF-α、 cTNⅠ和心肌MDA含量顯著高于I/R+HMGB200組(227.62±16.22 pg/ml,45.70±8.71 pg/ml,52.40±6.70 ng/ml,3.88±1.1 nmol/mg)(

32、均p＜0.01), SOD含量顯著低于I/R+HMGB200組(71.33±5.81 u/mg,68.43±3.55u/mgand75.28±7.53 u/mg, vs140.77±10.55 u/mg,均P＜0.01); I/R組與I/R+HMGB200+wortmannin組相比無明顯差異。⑵各組大鼠心肌梗死面積的比較:如圖(6-7)和表1(f)所示，與I/R組[(56.30±4.47)％],I/R+ wortmannin組[(55

33、.35±5.25)％]和I/R+HMGB200+wortmannin組[(53.55±3.25)％]比較，I/R+HMGB200處理組心肌梗死面積[(34.10±5.99)％]明顯降低（均P＜0.01）;I/R組與I/R+HMGB200+wortmannin組比較無明顯差別。⑶HE染色觀察結(jié)果:如圖8所示，sham組可見心肌組織中無炎細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌纖維排列規(guī)則;I/R組，I/R+wortmannin組和I/R+HMGB200+wortm

34、annin組可見有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌細(xì)胞水腫，肌纖維溶解斷裂;HMGB1處理組可見有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肌纖維排列大致正常。⑷各組心肌細(xì)胞凋亡結(jié)果:如圖(9-10)和表1(g)所示，與sham組[(5.43±1.58)％]相比，I/R組[(29.09±2.41)％]、I/R+ HMGB200組[(13.39±1.64)％]、I/R+ wortmannin組[（25.64±3.53）％]和I/R+HMGB200+wortmannin組[(2

35、7.13±3.53％]心肌細(xì)胞凋亡率顯著增加(均p＜0.01)。I/R+ wortmannin組[（25.64±3.53）％]和I/R+HMGB200+wortmannin組[(27.13±3.53)％]心肌細(xì)胞凋亡率明顯高于I/R+HMGB200[(13.39±1.6)％]（均p＜0.01）。⑸p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)的比較:與sham組比較，I/R組、I/R+HMGB200組、I/R+ wortmannin組和I/

36、R+HMGB200+wortmannin組p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白的表達(dá)顯著增加(p＜0.01);與I/R組比較，I/R+wortmannin組p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白的表達(dá)顯著增加(p＜0.01)，I/R+wortmannin組和I/R+HMGB200+wortmannin組與I/R組無明顯差異。與I/R+HMGB200組比較，I/R+wortmannin組和I/R+HMGB200+wortmannin組p

37、-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.01)。⑹超聲心動(dòng)圖心功能參數(shù)的變化:如圖(12-15)和表1(h-k)所示，與sham組相比，I/R組左室收縮期內(nèi)徑(LVIDs)(5.55±1.13 mm vs4.11±0.85 mm，p＜0.01)、左室舒張期內(nèi)徑(LVIDd)(6.61±0.85 mm vs4.04±0.28 mm，p＜0.01)、左室舒張末期容積(LVEDV)(0.71±0.16 ml vs0.41±0

38、.02 ml，p＜0.01)、左室收縮末期容積(LVESV)(0.50±0.22 ml vs0.28±0.07 ml，p＜0.05)和左室質(zhì)量指數(shù)(LV Mass)（1.43±0.11 g vs1.13±0.08 g，p＜0.01）明顯增加，左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)(46.68±3.92％vs89.90±7.13％，p＜0.01)和左室縮短分?jǐn)?shù)(FS)(37.90±13.07％vs77.09±5.64％，p＜0.01)顯著下降。與I/R

39、組相比，I/R+HMGB200組左室收縮期內(nèi)徑(LVIDs)(4.48±0.60 mmvs5.55±1.13 mm，p＜0.01)、左室舒張期內(nèi)徑(LVIDd)(5.07±0.64 mm vs6.61±0.85 mm，p＜0.05)、左室舒張末期容積(LVEDV)(0.54±0.10 ml vs0.71±0.16 ml，p＜0.01)、左室收縮末期容積(LVESV)(0.29±0.12 ml vs0.50±0.22 ml，p＜0.05)

40、和左室質(zhì)量指數(shù)(LV Mass)(1.20±0.11 g vs1.43±0.11 g，p＜0.01)明顯降低，左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)(77.39±4.98％vs46.68±3.92％，p＜0.01)和左室縮短分?jǐn)?shù)(FS)(59.71±13.40％vs37.90±13.07％，p＜0.01)增加。與I/R+HMGB200組相比，I/R+ wortmannin組和I/R+HMGB200+wortmannin組左室收縮期內(nèi)徑(LVIDs)(

41、4.48±0.60 mm vs6.28±0.64 and5.89±0.59 mm，均p＜0.01)、左室舒張期內(nèi)徑(LVIDd)(5.07±0.64 mm vs6.73±0.78 mm和6.21±1.0 mm，p＜0.01、p＜0.05)、左室舒張末期容積(LVEDV)(0.54±0.10 ml vs0.78±0.06 ml和0.72±0.12 ml，p＜0.01)、左室收縮末期容積(LVESV)(0.29±0.12 mlvs0.45±

42、0.07 ml和0.43±0.11 ml，p＜0.05)和左室質(zhì)量指數(shù)(LV Mass)（1.20±0.11 g vs1.50±1.17 g和1.41±0.44 g，均p＜0.01）明顯增加，左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)(77.39±4.98％vs42.88±6.36％和45.87±6.22％， p＜0.01)和左室縮短分?jǐn)?shù)(FS)(59.71±13.40％vs25.02±3.49％和39.70±8.43％，p＜0.01)顯著降低。⑺與sh

43、am相比，I/R組心肌CVF明顯增加（1.29±0.41％ vs35.31±3.92％，p＜0.01）。與I/R組比較，I/R+HMGB200處理組CVF值明顯下降(35.31±7.92％ vs10.94±1.54％，p＜0.01)。與I/R+HMGB200處理組相比，I/R+wortmannin組和I/R+HMGB200+wortmannin組CVF值顯著升高（10.94±1.54％vs34.10±2.76％和29.02±2.01％，

44、均p＜0.01）。
　　結(jié)論：①心肌缺血再灌注損傷表現(xiàn)為心肌細(xì)胞壞死、血清心肌損傷標(biāo)志物cTnⅠ和血清炎癥因子(如IL-6和TNF-α)以及氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA升高、心肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂、心肌纖維化以及p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)降低和心功能下降。②靜脈HMGB1干預(yù)可以減輕心肌缺血再灌注損傷，表現(xiàn)為心肌梗死面積縮小、心肌細(xì)胞凋亡率下降、心肌損傷標(biāo)志物降低、心肌組織p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)增加、心肌纖維化