Cathepsin L新型抑制劑Clik148對大鼠局灶性缺血性腦損傷的保護作用及其抑制星形膠質(zhì)細胞死亡的機制.pdf

1、目的：
　　 觀察Cathepsin L新型抑制劑Clik148對大鼠局灶性缺血性腦損傷的保護作用及其保護缺血缺氧性星形膠質(zhì)細胞損傷的機制：抑制Cathepsin L-Caspase信號機制的激活。
　　 方法：
　　 采用大鼠永久性大腦中動脈阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO)方法，建立腦缺血的大體模型。大鼠腦缺血前10min或缺血后6h側(cè)腦室

2、給予Clik148，以腦梗塞體積和行為學(xué)癥狀等指標(biāo)以及Western blot法檢測Clik148對缺血皮層MAP2蛋白表達水平的影響來評價Clik148對腦缺血性損傷的神經(jīng)保護作用。采用原代培養(yǎng)大腦皮層星形膠質(zhì)細胞氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation，OGD)方法，建立腦缺血的細胞模型。免疫熒光法和LDH法分別檢測OGD誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細胞GFAP陽性細胞數(shù)和乳酸脫氫酶漏出率；采用Westem Blot法和免疫

3、組化法檢測體內(nèi)和體外缺血缺氧對星形膠質(zhì)細胞Cathepsin L和凋亡相關(guān)蛋白的表達，以及Clik148對Cathepsin L和凋亡相關(guān)蛋白表達的影響。
　　 結(jié)果：
　　 在大鼠局灶性腦缺血體內(nèi)模型中，Clik148(12.5、25、50nmol)可顯著減小腦梗塞體積和改善行為學(xué)體征以及上調(diào)缺血皮層MAP2、GFAP蛋白的表達水平(P＜0.01)。在大鼠新生鼠的原代星形膠質(zhì)細胞氧糖剝奪的體外缺血模型，LDH結(jié)果顯示：

4、Clik148(25、50、100μM)劑量依賴性地降低氧糖剝奪引起的星形膠質(zhì)細胞LDH漏出率(P＜0．01)，可顯著增加星形膠質(zhì)細胞的細胞數(shù)目(P＜0.01)。Clik148對未進行氧糖剝奪處理的星形膠質(zhì)細胞沒有任何影響。Clik148同樣能夠上調(diào)星形膠質(zhì)細胞中GFAP蛋白表達。在體內(nèi)pMCAO大鼠誘導(dǎo)的缺血模型中，Western Blot結(jié)果顯示：大鼠大腦缺血皮層活性Cathepsin L、tBid、Caspase-3上調(diào)以及線粒體

5、的Cyt-c下調(diào)和細胞漿中Cyt-c上調(diào)。Clik148給藥組可對抗大鼠局灶性腦缺血模型大鼠缺血皮層中活性Cathepsin L、tBid、Caspase-3的上調(diào)以及線粒體內(nèi)的Cyt-c下調(diào)和細胞漿中Cyt-c上調(diào)。免疫組化結(jié)果顯示：大鼠大腦缺血皮層星形膠質(zhì)細胞中Cathepsin L從溶酶體釋放到細胞質(zhì)中以及Caspase-3陽性細胞增多；Clik148給藥組可抑制大腦缺血皮層中Cathepsin L釋放以及Caspase-3的陽性

6、細胞數(shù)目。在OGD誘導(dǎo)的體外缺血模型中，Western Blot結(jié)果顯示：星形膠質(zhì)細胞在OGD后，活性Cathepsin L、tBid、Caspase-3上調(diào)以及線粒體的Cyt-c下調(diào)和細胞漿中Cyt-c上調(diào)。Westem Blot結(jié)果亦顯示：Clik148可對抗OGD引起的星形膠質(zhì)細胞中活性Cathepsin L、tBid、Caspase-3和Cyt-c蛋白表達的變化。
　　 結(jié)論：
　　 Cathepsin L新型抑