替普瑞酮大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷的保護作用.pdf

1、目的:通過玻璃體腔注射NMDA制作大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷模型，觀察替普瑞酮對視網(wǎng)膜HSP70表達的影響，并觀察其對興奮性損傷視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞有無保護作用。
　　 方法:Wistar大鼠50只按隨機原則分為4組，包括正常組（5只）、空白對照組（15只）和實驗組（替普瑞酮腹腔注射組，30只），實驗組按照注射藥量不同分為低劑量組（15只）和高劑量組（15只）。正常組大鼠不做任何處理，實驗組大鼠腹腔注射替普瑞酮(200mg/Kg、800m

2、g/Kg)，空白對照組注射等量溶劑，注射藥物后1h空白對照組和實驗組大鼠均隨機取一眼玻璃體腔注射2μl80mmol/lNMDA并做好標記。并于造模后3h隨機處死相同數(shù)量的大鼠（各10只），用于檢測HSP70的表達，24h處死相同數(shù)量的大鼠（各5只），觀察RGCs的變化。同時正常對照組在1h時全部處死。免疫組織化學染色方法和實時熒光定量RT-PCR分析各組視網(wǎng)膜HSP70的表達，甲苯胺藍染色計數(shù)各組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目。
　　 結

3、果:HE染色顯示正常組大鼠視網(wǎng)膜組織結構完整，細胞形態(tài)規(guī)則，染色清晰?？瞻讓φ战M與低劑量組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目較正常大鼠明顯減少，細胞排列不規(guī)則，視網(wǎng)膜內(nèi)層萎縮，視網(wǎng)膜整體變薄。高劑量組大鼠視網(wǎng)膜損傷較空白對照組明顯減輕。實時熒光定量RT-PCR結果顯示，在正常組和空白對照組大鼠視網(wǎng)膜中只有微量的HSP70表達，低劑量組HSP70mRNA表達量較正常對照組稍有增加，高劑量組HSP70mRNA表達量明顯增加。免疫組織化學染色顯示替普瑞

4、酮能誘導HSP70在整個視網(wǎng)膜顯著表達，而正常組及空白對照組只見微量的HSP70棕黃色顆粒沉積于視網(wǎng)膜外層。免疫組織化學染色IOD值測定結果與熒光定量PCR結果相吻合。甲苯胺藍染色顯示正常組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞排列整齊，尼氏體染色清晰，空白對照組神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目明顯減少，尼氏體減少甚至消失，低劑量組無明顯改善，高劑量組神經(jīng)節(jié)細胞損傷明顯減輕。
　　 結論:1.成功建立大鼠視網(wǎng)膜興奮性損傷模型;
　　 2.腹腔注射高劑量替普瑞酮