血紅蛋白載氧體在大鼠視網(wǎng)膜慢性低灌注損傷中對視網(wǎng)膜的保護(hù)作用.pdf

1、目的：視網(wǎng)膜慢性低灌注損傷是許多臨床眼科疾病的病理生理基礎(chǔ)，是導(dǎo)致患者視力障礙甚至失明的主要原因，目前尚無療效肯定的藥物來預(yù)防或治療慢性低灌注導(dǎo)致的視網(wǎng)膜損傷。血紅蛋白載氧體(Hemoglobin-based oxygencarriers，HBOCs)為血紅蛋白分離純化修飾的新型血液代用品，該產(chǎn)品直徑僅為5-100nm，易于通過狹小的微血管，其半衰期長，具有更強(qiáng)的氧和二氧化碳轉(zhuǎn)運(yùn)能力，從而較好地解決了缺血組織的供氧問題，其在缺血性損傷疾

2、病中的作用得到越來越多的關(guān)注。本文通過對大鼠進(jìn)行雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎(Bilateralocclusion ofthe common carotid arteries，2VO)造成視網(wǎng)膜慢性低灌注損傷模型，探討血紅蛋白載氧體對視網(wǎng)膜慢性低灌注損傷的保護(hù)作用以及其可能的作用機(jī)制，為其今后在缺血性眼病中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
　　方法：成年雄性SD大鼠246只隨機(jī)分為3組。①2VO組：行雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎；②HBOCs干預(yù)組：行雙側(cè)頸總

3、動(dòng)脈結(jié)扎后，每天鼠尾靜脈注射2％濃度的血紅蛋白載氧體1ml；③假手術(shù)組。分別于造模后4d、8d、16d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)用HE染色法觀察低灌注損傷后各時(shí)間點(diǎn)大鼠視網(wǎng)膜生理結(jié)構(gòu)與形態(tài)變化，測量各組大鼠視網(wǎng)膜厚度，并用免疫組織化學(xué)染色法觀察各組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活和凋亡情況、HIF-1α和Caspase-3的陽性蛋白表達(dá)情況；應(yīng)用real time PCR技術(shù)檢測各組大鼠視網(wǎng)膜HIF-1α、Bax和Bc1-2的mRNA表達(dá)，及B

4、ax/Bc1-2的比值變化；通過TUNEL染色檢測各組大鼠視網(wǎng)膜各核層的凋亡水平；造模后第8d每組隨機(jī)選擇5只大鼠行視覺電生理檢測，觀察每組大鼠ERG標(biāo)準(zhǔn)混合反應(yīng)b波波幅變化。
　　結(jié)果：1、HE染色和免疫組化染色結(jié)果顯示，各時(shí)間點(diǎn)2VO組大鼠視網(wǎng)膜厚度與對應(yīng)的sham組相比萎縮變薄，各層視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)紊亂。而經(jīng)HBOCs后的實(shí)驗(yàn)組大鼠視網(wǎng)膜厚度及結(jié)構(gòu)無明顯變化。
　　2、免疫組化視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞Brn-3a特異性染色結(jié)果顯示各

5、時(shí)間點(diǎn)2VO組大鼠神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量減少，而HBOCs干預(yù)組的大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞與假手術(shù)組相比無明顯變化，HIF-1α和Caspase-3染色結(jié)果顯示HBOCs的干預(yù)可以明顯降低HIF-1α和Caspase-3陽性蛋白表達(dá)水平。real time PCR檢測發(fā)現(xiàn)2VO組的HIF-1α、Bax和Bc1-2的mRNA表達(dá)水平增高，Bax/Bc1-2的比值也高于假手術(shù)組，HBOCs組大鼠HIF-1α、Bax和Bc1-2的mRNA表達(dá)水平與假手術(shù)

6、組相比無明顯差別。TUNEL染色結(jié)果顯示各時(shí)間點(diǎn)2VO組大鼠各核層凋亡水平均高于假手術(shù)組，而HBOCs干預(yù)可以明顯降低視網(wǎng)膜各核層的凋亡水平。觀察造模后8d三組大鼠ERG檢查b波波幅變化，2VO組大鼠b波低平，而經(jīng)HBOCs干預(yù)后b波波幅恢復(fù)到正常水平。
　　結(jié)論：雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎所致的視網(wǎng)膜慢性低灌注模型可以造成視網(wǎng)膜缺血缺氧、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡及視網(wǎng)膜功能受損，HBOCs可以通過緩解缺血視網(wǎng)膜的乏氧狀態(tài)防止缺氧對視網(wǎng)膜組織造成的