大承氣湯含藥血清對內(nèi)毒素刺激的HBE表達CAV-1,eNOS,NF-КB及TLR-4的影響.pdf

1、目的:我們的前期研究發(fā)現(xiàn)了在部分腸梗阻導致的肺損傷大鼠模型中，大承氣湯（Dachengqi Decoction,DD）能降低肺臟水腫、間質(zhì)增厚、出血和炎性細胞大量浸潤等病理變化，證實DD 對此模型大鼠有保護作用。本實驗據(jù)此建立肺損傷的細胞模型，觀察DD 含藥血清對人支氣管上皮細胞（human bronchial epithelial cells,HBE）Caveolin-1（CAV-1）,eNOS,NF-КB p65及TLR-4表達的影

2、響，進一步探討DD 含藥血清對此模型的保護作用機制。
　　 方法:制備DD 及DD 含藥血清。將體外培養(yǎng)的HBE分為7組進行處理（正常血清對照組，單純LPS 干預組，低劑量DD 含藥血清組，中劑量DD 含藥血清組，高劑量DD 含藥血清組，西藥對照組，空白血清對照組），采四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法、免疫細胞化學法、Real-time PCR及Western blot 檢測不同劑量的DD 含藥血清對內(nèi)毒素（脂多糖，lipopol

3、ysaccharide,LPS 0.1μg/ml）刺激下的HBE表達CAV-1,eNOS,NF-КB 及TLR-4 mRNA水平及蛋白的影響。
　　 結(jié)果:MTT 結(jié)果顯示DD 含藥血清對LPS 刺激的HBE 有保護作用。免疫細胞化學法檢測CAV-1,eNOS,NF-КB 及TLR-4 蛋白水平的變化，單純LPS 干預組CAV-1,eNOS,NF-КB 及TLR-4 蛋白表達水平較正常血清對照組顯著增加(p<0.01)，其中，高

4、、中、低劑量DD 含藥血清組CAV-1,eNOS,NF-КB 及TLR-4 蛋白表達水平較單純LPS 干預組下降。在正常血清組HBE中有基礎量的CAV-1,eNOS,NF-КB 及TLR-4mRNA 及蛋白的表達，經(jīng)LPS 誘導24h后，單純干預組CAV-1,eNOS,NF-КB 及TLR-4mRNA表達較正常血清對照組顯著增加(p<0.01)，而不同劑量DD 含藥血清均可抑制CAV-1,eNOS,NF-КB 及TLR-4 mRNA表達