胰島素對內(nèi)毒素、chemerin激活肝臟NF-κB炎癥通路的影響.pdf

1、目的:臨床水平研究細(xì)菌性肝膿腫患者血漿胰島素水平與炎癥指標(biāo)及糖脂代謝、肝功能指標(biāo)的相關(guān)性，基礎(chǔ)水平研究胰島素對LPS、chemerin干預(yù)肝細(xì)胞的抗炎機(jī)制，為臨床炎癥感染應(yīng)用胰島素抗炎治療提供初步的理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.選取198例細(xì)菌性肝膿腫病例，按有無合并非酒精性脂肪性肝病分為合并非酒精性脂肪性肝病組（A組）和未合并非酒精性脂肪性肝病組（B組），其中A組以有無2型糖尿病分為亞組即非酒精性脂肪肝不合并2型

2、糖尿病組(A1組)、非酒精性脂肪肝合并2型糖尿病組（A2組），B組以有無2型糖尿病分為亞組即不合并2型糖尿病組（B1組），合并2型糖尿病組（B2組），檢測空腹胰島素(Fins)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、血糖、血脂，計(jì)算四組人數(shù)疾病構(gòu)成比胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。將研究對象的胰島素水平由低到高按四分位法分為胰島素極低組（1組）、胰島素低下組（2組）、胰島素中間水平組（3組）及胰島素高水平組（4組），檢測四組Fins、HbA1c

3、、血糖、血脂、肝功能、血沉(ESR)、內(nèi)毒素(LPS)、C反應(yīng)蛋白(CRP)水平，計(jì)算HOMA-IR及肝/脾CT值，分析胰島素水平與各相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。
　　 2.體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞株HepG2，通過倒置顯微鏡觀察形態(tài)學(xué)變化。將培養(yǎng)的肝細(xì)胞隨機(jī)分為16組:(1)正常對照組(2) LPS損傷組(3) LPS+2.5IU/ml胰島素干預(yù)組(4) LPS+5IU/ml胰島素干預(yù)組(5) LPS+10IU/ml胰島素干預(yù)組(6) cheme

4、rin損傷組(7) chemerin+2.5IU/ml胰島素干預(yù)組(8)chemerin+5IU/ml胰島素干預(yù)組(9) chemerin+10IU/ml胰島素干預(yù)組(10) LPS+chemerin損傷組(11)LPS+chemerin+2.5IU/ml胰島素干預(yù)組(12) LPS+chemerin+5IU/ml胰島素干預(yù)組(13)LPS+chemerin+10IU/ml胰島素干預(yù)組(14)2.5IU/ml胰島素對照組(15)5IU/

5、ml胰島素對照組(16)10IU/ml胰島素對照組，分別干預(yù)6h、12h、24h。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6(IL-6)及細(xì)胞裂解液中核因子-κB(NF-κB)、核轉(zhuǎn)錄因子κB抑制蛋白α(IκBα)的表達(dá)情況;采用流式細(xì)胞術(shù)測定各組細(xì)胞細(xì)胞膜表面的TLR-4的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.細(xì)菌性肝膿腫患者中A組與B組的人數(shù)構(gòu)成比分別為27.9

6、2％和72.08％，其中A1組:19例(9.6％);A2組:36例(18.27％); B1組:58例(28.93％);B2組:85例(43.15％)。按胰島素水平四份位法分為4組后，1組、2組、3組、4組ESR水平分別為（69.96±12.59 vs46.87±12.40 vs43.67±12.22 vs44.90±7.98）mm/h，CRP水平分別為(92.68±22.47 vs84.40±22.64 vs50.64±16.93 vs

7、61.30±19.83)pg/ml，內(nèi)毒素水平分別為（6.91±1.28 vs8.08±1.52 vs2.86±1.52 vs3.62±1.52）pg/ml，Pearson相關(guān)分析表明Fins與內(nèi)毒素、CRP、ESR、肝/脾CT值、AST呈線性負(fù)相關(guān)關(guān)系;多元逐步回歸分析表明肝/脾CT值、ESR、CRP是影響胰島素水平的危險(xiǎn)因素。
　　 2.肝癌細(xì)胞株HepG2的傳代培養(yǎng)情況良好。LPS、chemerin、LPS聯(lián)合chemer

8、in干預(yù)肝癌細(xì)胞株HepG2后，NF-κB、IL-6濃度明顯較正常對照組及胰島素對照組增高，且隨著時(shí)間延長有增高趨勢，相反IκBα濃度則明顯較正常對照組及胰島素對照組降低，且隨著時(shí)間變化有降低趨勢，而TNF-α濃度無明顯變化。在加入不同濃度胰島素干預(yù)后，NF-κB、IL-6濃度隨胰島素濃度的增高而降低，相反Iκ Bα濃度則隨著胰島素濃度的增高而增高，而TNF-α濃度仍無明顯變化;正常對照組與各胰島素對照組相比，NF-κB、IκBα、IL

9、-6及TNF-α濃度無明顯差異。LPS、chemerin可上調(diào)肝癌細(xì)胞株HepG2表面TLR-4的表達(dá)，而胰島素可下調(diào)肝癌細(xì)胞株HepG2表面的TLR-4表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 1.本研究通過統(tǒng)計(jì)細(xì)菌性肝膿腫患者的疾病構(gòu)成比發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性肝膿腫患者中約43.15％合并2型糖尿病，僅約9.6％合并單純脂肪肝，這是由于非酒精性脂肪性肝病因IR存在高胰島素血癥，而2型糖尿病因胰島功能減退存在低胰島素血癥所致。按胰島素水平四份位

10、法分組，細(xì)菌性肝膿腫患者血漿CRP、ESR、內(nèi)毒素、ALT、AST隨胰島素水平增高而降低，白蛋白水平隨著胰島素水平的增高而增高，表明胰島素可改善細(xì)菌性肝膿腫患者炎癥狀態(tài)及肝功能。
　　 2.本研究表明LPS、chemerin可通過上調(diào)肝癌細(xì)胞株HepG2表面TLR-4的表達(dá)而激活NF-κB途徑產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。胰島素可通過下調(diào)肝癌細(xì)胞株HepG2表面TLR-4的表達(dá)而抑制NF-κB途徑，減少炎癥因子的產(chǎn)生而發(fā)揮抗炎作用，且呈濃度依賴