電穿孔介導(dǎo)的基因治療兔下頜骨牽引成骨模型建立與鑒定.pdf

1、瀘州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文電穿孔介導(dǎo)的基因治療兔下頜骨牽引成骨模型建立與鑒定姓名：李盛華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：廖毅吳國(guó)平20090401瀘州醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文下頜骨的肌肉，暴露下頜骨。于下頜骨頦孔處，用微型電動(dòng)鉆截開(kāi)下頜骨，于下頜骨斷開(kāi)處安放2cm牽引器，固定，逐層縫合組織。于術(shù)后3天開(kāi)始牽引，每天08mm，連續(xù)牽引lO天后，將兔隨機(jī)分為3組：A組：質(zhì)粒電脈沖組，B組：質(zhì)粒組，c組：生理鹽水組。A、C組均施加電脈沖刺

2、激。B組只注射重組質(zhì)粒而不施加電刺激。各組分別于注射后34時(shí)、l天、3天、7天、14天處死動(dòng)物，切取牽引區(qū)組織約04cmx04cm大小，立即行冰凍切片檢查，用熒光顯微鏡觀(guān)察GFP蛋白表達(dá)情況，從而檢測(cè)外源基因的表達(dá)。檢測(cè)兔血清肝功能指標(biāo)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天fj#氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)和腎功能指標(biāo)尿素氮(BuN)、肌酐(Scr)和心、肝、腎組織學(xué)檢查。結(jié)果：A組轉(zhuǎn)染新西蘭大白兔，34時(shí)可觀(guān)察到綠色熒光蛋白的表達(dá)，l天時(shí)增強(qiáng)，3天時(shí)表達(dá)

3、最強(qiáng)，其后開(kāi)始逐漸下降，7天后表達(dá)減少，14天仍可觀(guān)察到微弱熒光。B組的表達(dá)時(shí)限與A組相同，但各時(shí)相點(diǎn)的表達(dá)強(qiáng)度明顯弱于A(yíng)組，C組在各時(shí)間段均未觀(guān)察到綠色熒光蛋白的表達(dá)。3組肝腎功能指標(biāo)兩兩比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Po05)。結(jié)論：電穿孔介導(dǎo)的帶有熒光標(biāo)記重組質(zhì)粒體內(nèi)轉(zhuǎn)染能夠在兔下頜骨牽引區(qū)組織內(nèi)表達(dá)，并且電穿孔能明顯提高重組質(zhì)粒的體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率，說(shuō)明電穿孔介導(dǎo)的重組質(zhì)粒體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔下頜骨牽引成骨的動(dòng)物模型是可行的，用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)是安全的。關(guān)鍵