舒洛地特對膜性腎病大鼠腎臟中podocin、CD2AP、nephrin表達(dá)的影響.pdf

1、目的:膜性腎病(membranons nephropathy，MN)是成人性腎病綜合征的常見病因，其病理特點(diǎn)為局限于腎小球上皮下免疫復(fù)合物沉積。臨床表現(xiàn)為大量蛋白尿。本研究通過注射陽離子化牛血清白蛋白的方法，建立SD大鼠膜性腎病模型，并應(yīng)用舒洛地特進(jìn)行干預(yù)，觀察大鼠24小時(shí)尿蛋白定量以及膜性腎病腎小球podocin、CD2AP、nephrin表達(dá)的變化，從而探討舒洛地特對膜性腎病干預(yù)的新靶點(diǎn)，為人類防治膜性腎病提供新的理論依據(jù)。

2、　　方法:選擇8周齡清潔級健康雄性SD大鼠40只，體重160±20g，普通飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，測24小時(shí)尿蛋白均為正常，采用隨機(jī)法將其分為4組，正常對照組、模型組、高劑量舒洛地特組、低劑量舒洛地特組，每組10只。除正常對照組外，其余組應(yīng)用自備陽離子化牛血清白蛋白(C-BSA)預(yù)免疫1周后，隔日尾靜脈注射C-BSA復(fù)制膜性腎病大鼠模型。正常對照組尾靜脈注射等體積生理鹽水，連續(xù)4周后代謝籠中留取各組大鼠24小時(shí)尿液，檢測24小時(shí)尿蛋白定量

3、。造模成功后高劑量舒洛地特組給予舒洛地特20mg/kg灌胃，低劑量舒洛地特組給予舒洛地特10mg/kg灌胃。模型組和正常對照組灌服等體積生理鹽水，各組大鼠自由進(jìn)食、飲水。連續(xù)給藥4周后，再次留取各組大鼠的24小時(shí)尿液，檢測24小時(shí)尿蛋白定量，隨后將大鼠處死，留取腎組織，應(yīng)用光鏡、電鏡觀察大鼠腎小球病變情況，采用免疫組織化學(xué)方法檢測podocin、CD2AP、nephrin的表達(dá)情況，結(jié)果應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)IPP(Image-Pro Plu

4、s)進(jìn)行半定量分析。
　　結(jié)果:
　　1.實(shí)驗(yàn)大鼠的一般情況
　　正常對照組的大鼠飲食、尿量均正常，反應(yīng)靈敏，眼睛有神，肌肉豐滿。其余三組大鼠經(jīng)尾靜脈注射C-BSA后，出現(xiàn)飲食減少、精神萎靡、毛發(fā)脫落、少動抱團(tuán)，大部分大鼠出現(xiàn)陰囊水腫。實(shí)驗(yàn)最后一周時(shí)，與正常對照組相比，造模各組大鼠體形較小，毛發(fā)脫落（腹部為重）。
　　2.24小時(shí)尿蛋白定量
　　24小時(shí)尿蛋白定量，在連續(xù)尾靜脈注射C-BSA4周后，模型組、

5、高劑量舒洛地特組、低劑量舒洛地特組與正常對照組比較均顯著升高(P均＜0.05)，連續(xù)舒洛地特灌胃4周后，高劑量舒洛地特組與低劑量舒洛地特組24小時(shí)尿蛋白較前均有所降低，與模型組相比有顯著性差異(P均＜0.05)，與低劑量舒洛地特組相比，高劑量舒洛地特組24小時(shí)尿蛋白降低更明顯(P＜0.05)。
　　3.腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察
　　光鏡:正常對照組大鼠腎小球形態(tài)基本正常，毛細(xì)血管袢開放良好，無固有細(xì)胞增多，無基底膜增厚;模型組大

6、鼠腎小球固有細(xì)胞增多，基底膜明顯增厚;高劑量舒洛地特組和低劑量舒洛地特組大鼠的腎小球固有細(xì)胞輕度增多，基底膜增厚較模型組減輕。
　　電鏡:正常對照組大鼠的足細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，足突排列整齊;模型組大鼠的腎小球基底膜彌漫增厚，上皮下電子致密物沉積，足細(xì)胞足突廣泛融合或消失;低劑量舒洛地特組大鼠腎小球基底膜不規(guī)則增厚，上皮下電子致密物沉積，足突部分融合;高劑量舒洛地特組大鼠基底膜輕度增厚，上皮下少量電子致密物沉積，足突部分融合。
　　

7、4.免疫組化結(jié)果
　　從免疫組化染色中可以觀察到podocin、CD2AP、nephrin三種蛋白表達(dá)于腎小球上皮下。該三種蛋白在正常對照組腎小球上均有大量表達(dá)，模型組、低劑量舒洛地特組及高劑量舒洛地特組腎小球上也均有表達(dá)，但較正常對照組表達(dá)降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05)，模型組中podocin、CD2AP、nephrin的表達(dá)較低劑量舒洛地特組及高劑量舒洛地特組表達(dá)均降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05)，低劑量舒洛地特組與

8、高劑量舒洛地特組相比，podocin、CD2AP、nephrin表達(dá)較低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.膜性腎病大鼠足細(xì)胞nephrin、podocin及CD2AP表達(dá)下降，并與足細(xì)胞足突融合程度及蛋白尿程度變化一致。提示nephrin、podocin及CD2AP可能參與膜性腎病腎小球足細(xì)胞損傷和蛋白尿產(chǎn)生。
　　2.舒洛地特可以降低膜性腎病大鼠24小時(shí)尿蛋白含量。
　　3.舒洛地特可以