右美托咪定抑制膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景和目的:小膠質(zhì)細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，目前研究認(rèn)為小膠質(zhì)細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞是中樞炎性細(xì)胞因子的重要來源，在中樞慢性疾病及神經(jīng)退行性疾病中發(fā)揮重要作用。右美托咪定作為一種高選擇性α2腎上腺能受體激動劑，可降低老年患者術(shù)后譫妄和認(rèn)知功能障礙的發(fā)生率，動物實(shí)驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn)右美托咪定可減少認(rèn)知功能損害，這可能與其抑制中樞炎癥相關(guān)。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示，右美托咪定能夠明顯抑制小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的釋放，而膠質(zhì)細(xì)胞是中樞

2、炎性因子的主要來源，因此研究右美托咪定調(diào)控炎性因子的具體機(jī)制將有助于揭示術(shù)后譫妄及認(rèn)知功能損害的發(fā)生機(jī)制并為藥物防治提供新思路。本研究擬采用脂多糖(LPS)刺激小膠質(zhì)細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，并用右美托咪定預(yù)處理觀察炎癥指標(biāo)，同時(shí)檢測相關(guān)蛋白表達(dá)的變化，探討其調(diào)節(jié)中樞炎癥的可能機(jī)制。
　　材料與方法:原代星型膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞（BV2小膠質(zhì)細(xì)胞系和原代小膠質(zhì)細(xì)胞）分離培養(yǎng)，不同濃度的右美托咪定（0.01，0.1，1和10μ

3、mol/L）預(yù)處理，同時(shí)給予ERK、JNK或p38特異性的抑制劑，然后培養(yǎng)液中加入LPS刺激，比色法測定細(xì)胞活力，硝酸酶還原法檢測培養(yǎng)液中NO的含量，實(shí)時(shí)定量PCR法檢測iNOS，IL-6、TNF-α mRNA的表達(dá)量，同時(shí)利用western blot檢測培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的ERK、JNK和p38表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:原代星型膠質(zhì)細(xì)胞暴露于不同濃度的右美托咪定（0.01，0.1，1和10μmol/L）或LPS(1μg/ml)24h。用比

4、色法測定細(xì)胞活力，結(jié)果顯示，右美托咪定(0.01，0.1，1和10μmol/L)和LPS(1μg/ml)對星型膠質(zhì)細(xì)胞的活性沒有影響(P＞0.05);原代星型膠質(zhì)細(xì)胞用不同濃度的右美托咪定提前30分鐘處理后，再給予LPS刺激，結(jié)果顯示，右美托咪定(≥0.1μmol/L)能夠明顯抑制原代星型膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α和IL-6的表達(dá)，且呈現(xiàn)出濃度相關(guān)性(P＜0.01);當(dāng)右美托咪定的終濃度小于0.1μmol/L時(shí)，未能顯著抑制TNF-α和IL-6

5、的表達(dá)(P＞0.05);1μg/ml的LPS可引起p-JNK和p-p38的顯著升高(P＜0.01)，右美托咪定(≥0.1μmo l/L)預(yù)處理后可顯著降低p-JNK的表達(dá)(P＜0.01); JNK的特異性抑制劑SP600125可與右美托咪定協(xié)同抑制星型膠質(zhì)細(xì)胞TNF-o和IL-6表達(dá)(P＜0.01)。
　　小膠質(zhì)細(xì)胞暴露于不同濃度的右美托咪定（0.01，0.1，1，10和100μmol/L）和LPS（0.1，1，和10μ g/ml

6、）對小膠質(zhì)細(xì)胞無明顯毒性(P＞0.05)，而100μmol/L的右美托咪定則對原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞的活性有顯著影響(P＜0.01);當(dāng)右美托咪定劑量≥0.1μmol/L時(shí)，可降低LPS導(dǎo)致的小膠質(zhì)細(xì)胞NO產(chǎn)生和iNOS表達(dá)(P＜0.01)，而劑量為0.01μmol/L時(shí)，右美托咪定預(yù)處理未顯示出相應(yīng)的抑制作用(P＞0.05);對于MAPKs通路的作用，右美托咪定在≥0.1μmol/L時(shí)可明顯降低p-ERK的表達(dá)(P＜0.01)，隨著右美

7、托咪定劑量的增加其抑制效果沒有增加(P＞0.05)，同時(shí)右美托咪定對于總的ERK水平?jīng)]有影響(P＞0.05);ERK的特異性抑制劑PD98059可與右美托咪定協(xié)同抑制小膠質(zhì)細(xì)胞iNOS的表達(dá)和NO的產(chǎn)生(P＜0.01)。
　　結(jié)論:右美托咪定（≥0.1μmol/L）可顯著抑制星型膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α和IL-6的表達(dá)量，JNK信號途徑參與右美托咪定對于星型膠質(zhì)細(xì)胞的炎性反應(yīng)抑制作用;右美托咪定（≥0.1μ mol/L）可顯著抑制小膠質(zhì)