2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:觀察右美托咪定(dexmedetomidine, DEX)對缺氧/復(fù)氧( hypoxia/reoxygenation,H/R)損傷A549細(xì)胞的干預(yù)作用及機(jī)制。
  方法:培養(yǎng)A549細(xì)胞,將長至對數(shù)生長期的細(xì)胞隨機(jī)分成4組(n=10):常氧組(N組),DEX組(D組),H/R損傷組(H組),H/R損傷+DEX干預(yù)組(HD組)。造模前先將4組細(xì)胞的完全培養(yǎng)基更換成無血清的F12K培養(yǎng)基,在常氧培養(yǎng)箱中預(yù)處理1個小時。N組:A

2、549細(xì)胞在常氧培養(yǎng)箱中用無血清F12K培養(yǎng)液培養(yǎng)30h。D組:A549細(xì)胞用含DEX(1nM)的無血清F12K培養(yǎng)液在常氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30h。H組:A549細(xì)胞用OGD液在缺氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h,再用無血清F12K培養(yǎng)液在常氧培養(yǎng)箱中復(fù)氧24h。HD組:A549細(xì)胞缺氧處理6h,復(fù)氧24h, DEX(1nM)在缺氧開始時加入培養(yǎng)液。造模結(jié)束后, A549細(xì)胞在倒置顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)改變的觀察。A549細(xì)胞活力檢測采用CCK-8法。A54

3、9細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)檢測采用原位末端標(biāo)記(TUNEL)法。蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測細(xì)胞內(nèi)GRP78、CHOP、p-JNK、caspase-12、caspase-3蛋白的表達(dá)水平。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)( RT-PCR)檢測GRP78、CHOP、JNK、caspase-12 mRNA的表達(dá)水平。各組caspase-3酶的活性檢測采用caspase-3活性檢測試劑盒。
  結(jié)果:⑴在N組和D組中,大量細(xì)胞呈梭型,

4、貼壁生長。胞體明亮,細(xì)胞核完整,未見懸浮細(xì)胞。H組中貼壁細(xì)胞間間隙增大,數(shù)量減少顯著。細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)變化,細(xì)胞長出分支,呈多邊型。有些細(xì)胞發(fā)生融合現(xiàn)象,細(xì)胞核固縮,胞體變暗。大量細(xì)胞碎片及死細(xì)胞漂浮在上清液中。與H組相比較,HD組貼壁細(xì)胞數(shù)相對較多,上清液中細(xì)胞碎片及死細(xì)胞數(shù)量減少。⑵與N組比較,H組A549細(xì)胞的OD值明顯下降(P<0.01)。HD組與H組相比,OD值上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。⑶與N組比較, H組A549細(xì)

5、胞AI值升高( P<0.01),凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增加。HD組與H組相比,AI值降低明顯,凋亡細(xì)胞數(shù)相對減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。⑷與N組相比,D組GRP78、CHOP、caspase-12、p-JNK和caspase-3蛋白水平無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);H組中 GRP78、CHOP、caspase-12、p-JNK和caspase-3蛋白表達(dá)均明顯升高(P<0.01)。HD組與H組相比, CHOP、caspase-12、

6、p-JNK和caspase-3蛋白表達(dá)顯著下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。⑸與N組相比,D組GRP78、CHOP、caspase-12和JNK mRNA水平無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);H組中GRP78、CHOP、caspase-12和JNK mRNA表達(dá)均明顯升高(P<0.01)。HD組與H組相比,GRP78 mRNA表達(dá)上升(P<0.01), CHOP、caspase-12、JNK mRNA表達(dá)顯著下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

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