骨髓靶向性全反式維甲酸聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒的研究.pdf

1、目的：探索白血病治療藥物骨髓靶向給藥治療的新思路、新方法和新技術(shù)。白血病是一種造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，俗稱“血癌”，其特征表現(xiàn)為正常造血細胞顯著減少，而在骨髓及其他造血組織中有廣泛的白血病細胞異常增生，并浸潤其他組織器官，導致正常造血功能衰竭。全反式維甲酸以往主要用于治療各種類型的皮膚病，近年來被廣泛用于急性早幼粒細胞白血病(APL)的誘導分化、凋亡治療，具有完全緩解率高(達90％以上)、彌散性血管內(nèi)凝血發(fā)生率低及無骨髓抑制副作用等優(yōu)點。以

2、生物降解型高分子材料聚氰基丙烯酸正丁酯為載體，選擇全反式維甲酸為模型藥物，采用現(xiàn)代靶向制劑技術(shù)，研制骨髓靶向性全反式維甲酸聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒(ATRA-PBCA-NP)。對毫微粒進行外觀形態(tài)學、粒徑、粒度分布研究；建立質(zhì)量控制方法與標準，進行毫微粒包封率、載藥量、體外釋放度、穩(wěn)定性等實驗研究；研究骨髓靶向性全反式維甲酸聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒動物體內(nèi)藥物動力學與組織分布學，進行靶向性評價；探討骨髓靶向給藥治療機理，力求對白血病藥物

3、治療局限的突破，為骨髓靶向給藥提供科學的理論依據(jù)。 方法：采用乳化聚合法制備ATRA-PBCA-NP，根據(jù)單因素試驗，采用均勻?qū)嶒炘O計優(yōu)化、篩選處方與制備工藝；采用電子透射顯微鏡觀察毫微粒的外觀形態(tài)，激光散射粒度分析儀測定毫微粒的粒徑及其粒度分布，電視顯微電泳儀測定毫微粒表面Zeta電位；低溫超速離心法測定毫微粒的包封率、載藥量；動態(tài)膜透析法考察毫微粒體外釋藥特性，研究體外釋藥機理和釋藥途徑，并進行初步穩(wěn)定性研究；以全反式維甲酸

4、注射液為參比標準進行ATRA-PBCA-NP家兔體內(nèi)藥物動力學、大鼠體內(nèi)組織分布學研究和靶向性評價。 結(jié)果：影響毫微粒粒徑主要因素為α-BCA用量、乳化劑PluronicF-127用量、穩(wěn)定劑Dextran-70用量、pH值和攪拌時間等；最佳優(yōu)化處方與工藝為：BCA用量為0.06ml，乳化劑PluronicF-127用量為75mg，穩(wěn)定劑Dextran-70用量為100mg，pH值為1.4，攪拌時間為5h。根據(jù)優(yōu)化工藝制得三批A

5、TRA-PBCA-NP，電子透射顯微鏡下為圓整均勻的球形顆粒，無粘連。激光散射粒度分析儀測得毫微粒平均粒徑為47.7nm，粒徑分布在15～100nm范圍內(nèi)。建立紫外分光光度法質(zhì)量控制方法與標準，藥物濃度在0.7～6.2μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為y=0.1450x+0.0037(r=0.9999)，日內(nèi)、日間精密度的RSD均小于2％，平均回收率為99.3％；測得毫微粒載藥量為16.12％，包封率為83.67％。 毫微

6、粒體外釋藥符合雙相動力學方程，回歸方程為100-R=42.34.e-2.89t+58.69.e-0.11t(rα=0.9961，rβ=0.9998)，釋藥機理主要為藥物擴散；原料藥體外釋藥符合一級速率方程，回歸方程為1n(100-R)=-2.3532t+4.8444(r=0.9946)。 選擇6％乳糖為支架劑，制備了ATRA-PBCA-NP凍干針劑。初步穩(wěn)定性考察結(jié)果表明，40℃、相對濕度75％條件下放置3個月，毫微粒的外觀形狀

7、、pH值、藥物含量均保持穩(wěn)定。光照試驗表明，毫微粒對光不穩(wěn)定，需避光保存。毫微粒經(jīng)60Co輻照滅菌，其外觀性狀、pH值和含量均未發(fā)生明顯變化。 建立了高效液相色譜法測定ATRA血藥濃度及在體內(nèi)各組織分布的方法，生物樣品預處理方法簡單，在所選色譜條件下，內(nèi)源性物質(zhì)不干擾ATRA的測定，回收率高，重現(xiàn)性好。家兔血漿方法回收率大于95％，日內(nèi)精密度RSD小于1％，日間精密RSD小于2％；大鼠各組織方法回收率均大于90％，日內(nèi)精密度小于

8、4％，日間精密度小于6％：線性范圍為2～1000ng/ml，最低檢測濃度為2ng/ml，可滿足生物樣品分析方法的要求。 家兔體內(nèi)動力學和大鼠組織器官分布實驗結(jié)果表明，家兔耳緣靜脈注射ATRA注射液藥-時曲線符合單室模型特征，半衰期(t1/2ke)為0.916h，ATRA-PBCA-NP藥-時曲線符合雙室模型特征，t1/2α為0.365h，t1/2β為6.363h。毫微粒靜脈注射后一部分被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，一部分穿過骨髓一血屏障進

9、入骨髓，與ATRA注射液相比，制成毫微粒后骨髓總靶向效率由2.27％提高到8.14％(提高了258.59％)。 結(jié)論：全反式維甲酸在APL的誘導分化治療中療效顯著，但普遍存在首過效應、生物半衰期短(t1/2=1.1～1.8h)和一定毒副作用等缺點，而且持續(xù)治療易產(chǎn)生耐藥性；理化性質(zhì)不穩(wěn)定，遇熱、光均可氧化失效，制成毫微粒后藥物有效地靶向輸送、濃集于骨髓病變部位，減少用藥劑量和用藥次數(shù)，降低毒副作用，提高治療指數(shù)。體外釋放度和體內(nèi)