BMP6基因在雞股骨、脛骨生長(zhǎng)板的表達(dá)以及其對(duì)軟骨細(xì)胞增殖分化調(diào)控的探究.pdf

1、雞的體重和其生產(chǎn)性能的高低取決于骨骼發(fā)育程度，脛長(zhǎng)的變化與整個(gè)骨架發(fā)育呈強(qiáng)正相關(guān)，而且，隨著肉雞的快速生長(zhǎng)，腿部疾病也日益增加。研究表明，家禽長(zhǎng)骨的生長(zhǎng)發(fā)育及成熟都是由一系列因子相互作用實(shí)現(xiàn)的。BMP6作為BMPs家族成員之一，可通過(guò)Smad信號(hào)通路在骨骼發(fā)育中起調(diào)控作用，但長(zhǎng)骨的發(fā)生發(fā)育是否與BMP6存在相關(guān)？BMP6在調(diào)控骨骼發(fā)育過(guò)程中是否還有其他信號(hào)通路的參與？迄今尚不清楚。因此，本試驗(yàn)針對(duì)上述的兩個(gè)問(wèn)題進(jìn)行探究。
　　本試

2、驗(yàn)采用體型上有較大差異的艾維茵與矮腳黃雞為研究對(duì)象，首先利用realtime-PCR技術(shù)檢測(cè)BMP6基因在雞不同生長(zhǎng)時(shí)間點(diǎn)的股骨生長(zhǎng)板和脛骨生長(zhǎng)板兩個(gè)組織中的表達(dá)情況，探究BMP6與長(zhǎng)骨發(fā)育的關(guān)系;其次比較兩個(gè)品種軟骨細(xì)胞的增殖能力及BMP6在不同品種軟骨細(xì)胞中的表達(dá)情況，從而探討兩個(gè)品種軟骨細(xì)胞是否存在差異，為后續(xù)試驗(yàn)提供參考;最后我們以軟骨細(xì)胞為模型，進(jìn)行不同濃度生長(zhǎng)激素的誘導(dǎo)，檢測(cè)生長(zhǎng)激素誘導(dǎo)過(guò)程中BMP6的表達(dá)量變化，并結(jié)合si

3、RNA干擾技術(shù)，檢測(cè)干擾BMP6后，軟骨細(xì)胞增殖分化相關(guān)信號(hào)通路中關(guān)鍵基因的表達(dá)情況，探究了BMP6在軟骨生長(zhǎng)過(guò)程中的主要作用機(jī)制。結(jié)果表明:
　　(1)艾維茵與矮腳黃兩個(gè)品種的雞在胚胎期與初生時(shí)個(gè)體上并沒(méi)有顯著差異。且在40日齡時(shí)，艾維茵公、母雞各性狀（雞重、腿重、股骨重、脛骨重、股骨長(zhǎng)、脛骨長(zhǎng)、股骨直徑、脛骨直徑）顯著高于矮腳黃公、母雞;70日齡時(shí)，艾維茵公雞除脛骨長(zhǎng)/脛骨直徑兩個(gè)性狀外，其他性狀顯著高于矮腳黃公雞，艾維茵母雞

4、各性狀顯著高于矮腳黃母雞。
　　(2)BMP6在艾維茵和矮腳黃兩個(gè)品種不同時(shí)間點(diǎn)的股骨生長(zhǎng)板和脛骨生長(zhǎng)板中的表達(dá)差異不顯著，說(shuō)明BMP6對(duì)雞股骨和脛骨的分化發(fā)育成熟不具有決定性作用，但卻參與了軟骨生長(zhǎng)板的分化過(guò)程。
　　(3) BMP6在艾維茵與矮腳黃軟骨細(xì)胞培養(yǎng)第四天時(shí)的表達(dá)量均顯著增加，與兩品種軟骨細(xì)胞增殖曲線相吻合，但兩者軟骨細(xì)胞增殖能力和BMP6在兩品種軟骨細(xì)胞的表達(dá)量差異均不顯著，這表明BMP6在軟骨細(xì)胞增殖分化時(shí)

5、高表達(dá)。
　　(4)軟骨細(xì)胞對(duì)50ng/ul生長(zhǎng)激素的誘導(dǎo)最敏感，且在48h時(shí)增殖明顯，BMP6的表達(dá)也顯著(P＜0.05)升高，表明軟骨細(xì)胞增殖時(shí)，BMP6高表達(dá)。干擾BMP6后，與對(duì)照組相比，48h、72h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)處理組中的ColⅡ、ColⅩ表達(dá)量都顯著(P＜0.05)降低，表明軟骨細(xì)胞的增殖分化都受到了抑制。因此，我們認(rèn)為BMP6參與了軟骨細(xì)胞增殖分化過(guò)程。
　　(5) siRNA干擾BMP6表達(dá)時(shí)，軟骨細(xì)胞增殖分化

6、受阻，IGF1R、JAK2、PKC、PTH和PTHrP在48h時(shí)處理組細(xì)胞中的表達(dá)量與對(duì)照組差異不顯著，而在72h處理組細(xì)胞中的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05);且Ihh在48h、72h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)處理組中的表達(dá)與對(duì)照組相比都顯著(P＜0.05)降低。上述結(jié)果說(shuō)明IGF1R、JAK2、PKC、PTH、Ihh、PTHrP這幾個(gè)基因參與了BMP6對(duì)軟骨細(xì)胞的增殖分化調(diào)控。
　　綜上所述，BMP6主要通過(guò)調(diào)控軟骨細(xì)胞增殖分化參與雞骨骼