分化抑制因子1基因?qū)MP-2促進兔椎間盤軟骨終板細胞軟骨特性基因表達的影響.pdf

1、目的：探討通過慢病毒干擾細胞分化抑制因子1基因表達，對BMP-2增加兔椎間盤軟骨終板細胞軟骨特異性基因Ⅱ型膠原、aggrecan表達的影響。
　　方法：兔椎間盤軟骨終板組織從新西蘭大白兔獲取，分離并培養(yǎng)軟骨終板細胞，使用第2代軟骨終板細胞進行實驗。使用綠色熒光蛋白慢病毒（GFP LV）、高表達Id1基因慢病毒(Id1+LV)及RNA干擾Id1基因慢病毒分別轉(zhuǎn)染二代軟骨終板細胞，通過熒光顯微鏡了解慢病毒轉(zhuǎn)染情況,RT-PCR及Wes

2、tern blot法檢測慢病毒轉(zhuǎn)染兔軟骨終板情況，不同慢病毒轉(zhuǎn)染對兔軟骨終板細胞Id1 mRNA表達和Id1蛋白合成的影響。RNAi Id1、高表達Id1慢病毒分別和BMP-2慢病毒共同轉(zhuǎn)染軟骨終板細胞，并設(shè)置BMP-2慢病毒轉(zhuǎn)染組、空載慢病毒轉(zhuǎn)染組對照，采用實時熒光定量 PCR（RT-PCR）、ELISA法觀察軟骨終板內(nèi) Id1表達上調(diào)或下降，Id1蛋白合成差異對 BMP-2上調(diào)椎間盤終板軟骨終板細胞合成Ⅱ型膠原和aggrecan的作

3、用。
　　結(jié)果：
　?。?）慢病毒轉(zhuǎn)染兔軟骨終板后與原代對比，細胞形態(tài)無明顯改變，高表達Id1 LV和RNAi Id1 LV能有效轉(zhuǎn)染兔軟骨終板細胞，并干擾內(nèi)源性Id1基因的表達。
　?。?）BMP-2 LV和高表達Id1 LV共同轉(zhuǎn)染兔軟骨終板細胞后，COLⅡ、aggrecan mRNA表達和蛋白合成均顯著高于BMP-2 LV、高表達Id1 LV單獨轉(zhuǎn)染，比較差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）終板細