Id1基因?qū)MP-2維持兔髓核細(xì)胞軟骨特性的影響.pdf

1、目的：構(gòu)建過表達(dá)和沉默Id1基因的慢病毒載體，以兔椎間盤髓核細(xì)胞為研究對(duì)象，觀察經(jīng)BMP-2誘導(dǎo)后的髓核細(xì)胞內(nèi)Id1基因的表達(dá)水平調(diào)整以后細(xì)胞分泌軟骨特性因子的變化，研究Id1在BMPs維持椎間盤細(xì)胞軟骨表型中的作用。
　　方法：（1）設(shè)計(jì)針對(duì)Id1基因過表達(dá)和RNA干擾(RNAi)的序列，應(yīng)用基因重組技術(shù)將目的基因片段連接到慢病毒載體，然后感染293T細(xì)胞之后進(jìn)行測(cè)序鑒定與病毒滴度檢測(cè)；（2）以兩種慢病毒分別感染兔髓核細(xì)胞，QR

2、T-PCR和Western blot檢測(cè)髓核細(xì)胞Id1 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)；（3）重組腺病毒AdBMP2感染髓核細(xì)胞后，利用已制備的兩種慢病毒再次感染細(xì)胞，QRT-PCR、ELISA檢測(cè)細(xì)胞表達(dá)軟骨特性分子的能力與變化趨勢(shì)。
　　結(jié)果：（1）成功構(gòu)建Id1基因過表達(dá)與RNAi慢病毒載體，測(cè)序結(jié)果與Id1基因序列比對(duì)后確認(rèn)一致。（2）慢病毒感染髓核細(xì)胞后，Id1基因的mRNA與蛋白的表達(dá)量與正常細(xì)胞組及空載病毒感染組比，過表達(dá)組

3、增加，RNAi組下降，符合預(yù)期結(jié)果。（3）細(xì)胞內(nèi)Id1的表達(dá)增加可促進(jìn)軟骨特性因子colⅡ（0.407±0.083）和ACAN（0.284±0.074）的mRNA表達(dá)。（4）AdBMP2處理細(xì)胞后，Id1基因表達(dá)增加可使colⅡ（0.590±0.072）和ACAN（0.351±0.066）的mRNA表達(dá)進(jìn)一步顯著升高；Id1表達(dá)降低時(shí)，以上因子的表達(dá)被明顯抑制(colⅡ:0.244±0.060, ACAN:0.168±0.034)。