高糖環(huán)境對BMP-2、IGF-1轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs基因表達的影響.pdf

1、骨折愈合過程包括兩部分，即細胞因子對骨髓間充質(zhì)干細胞分化增殖的調(diào)控和細胞因子的骨誘導(dǎo)。骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)與胰島素樣生長因子-1（insulin-like growth factor，IGF-1）是影響骨折愈合的重要細胞因子。BMP-2可誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC)分化成骨細胞，是成骨作用最

2、強的因子；IGF-1可促進成骨細胞的形成和分化，并有類似胰島素的作用。糖尿病患者骨折難愈合、不愈合是多因素共同作用的結(jié)果，已有實驗證實，糖尿病患者體內(nèi)BMP-2及IGF-1水平在骨折端局部及血清均降低，早期局部骨癡中BMP-2，IGF-1表達減少及早期血清中BMP-2、IGF-I含量減少是導(dǎo)致糖尿病大鼠骨折愈合差的重要原因之一。但能否將外源BMP-2、IGF-I引入BMSCs內(nèi)從而提高二者的表達來為治療糖尿病骨折難愈合、不愈合尚無系統(tǒng)研

3、究。
　　 目的：觀察骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2、胰島素樣生長因子-1在高糖環(huán)境下能否轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，轉(zhuǎn)染成功后目的基因是否表達及表達量的情況，及二者有無協(xié)同效應(yīng)。
　　 方法：選擇Wistar雄性大鼠BMSC傳代后第3代細胞作為腺病毒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的靶細胞，分為實驗對照組，空載體組，BMP-2組，IGF-1組，BMP-2+IGF-1組，每組設(shè)3樣本。其中實驗對照組未經(jīng)腺病毒感染，空載體組由未負載目的基因的空白腺病毒感染

4、，其余組由各自對應(yīng)的負載目的基因的腺病毒感染。應(yīng)用real-time PCR技術(shù)，酶聯(lián)免疫吸附劑測定法(ELISA)法進行檢測，實驗數(shù)據(jù)采用(?)±s表示，采用成組設(shè)計資料的t檢驗分析由SPSS17.0統(tǒng)計軟件完成，P＜0.05表示統(tǒng)計學(xué)上差異有顯著性，P＜0.01表示統(tǒng)計學(xué)上差異非常顯著。
　　 結(jié)果：高糖環(huán)境下BMP-2、IGF-1基因各自及共同轉(zhuǎn)染BMSC后，BMSC成活，BMP-2基因表達的產(chǎn)物峰值出現(xiàn)在轉(zhuǎn)染后72h，B

5、MP-2組灰度值為(1.86±0.06)，產(chǎn)物濃度為(58.6±1.61)μg/L，BMP-2+IGF-1組灰度值為(2.37±0.34)，產(chǎn)物濃度為(67.61±1.91)μg/L，兩組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；1GF-1的基因表達的產(chǎn)物峰值出現(xiàn)在轉(zhuǎn)染后48h，IGF-1組灰度值為(1.48±0.03)，產(chǎn)物濃度為(65.17±3.64)μg/L，BMP-2+IGF-1組灰度值為(1.93±0.17)，產(chǎn)物濃度為(73.94