雌二醇對實驗性阿爾茨海默病大鼠β淀粉樣肽和β分泌酶影響的研究.pdf

1、目的：采用2×2方差分析實驗設(shè)計，通過雙側(cè)穹隆-海馬傘切斷結(jié)合卵巢切除的方法建立大鼠模型，觀察多腦區(qū)(皮質(zhì)區(qū)、海馬CAl區(qū)、杏仁復(fù)合體區(qū)、基底前腦Meynert核區(qū))β-淀粉樣蛋白1-40(Aβ<,1-40>)表達(dá)的變化，優(yōu)化建立實驗性阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease，AD)動物模型。同時觀察補(bǔ)充外源性雌激素對模型大鼠相應(yīng)腦區(qū)Aβ<,1-40>和β分泌酶表達(dá)的影響，探討影響β淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)代謝過程的機(jī)制

2、。 方法：研究分二部分。研究一：實驗性阿爾茨海默病動物模型的建立。健康雌性Wistar大鼠28只，按2×2方差分析方法設(shè)計分組，2因素為雙側(cè)卵巢和雙側(cè)穹隆-海馬傘，2水平分為卵巢切除與不切除，穹隆-海馬傘切斷與不切斷。隨機(jī)分為4組：①雙側(cè)卵巢切除組(OVX組)；②雙側(cè)穹隆-海馬傘切斷組(FF組)；③雙側(cè)卵巢切除加穹隆-海馬傘切斷組(OF組)；④假手術(shù)對照組。每組大鼠7只。研究二：雌二醇對模型大鼠β淀粉樣肽和β分泌酶干預(yù)作用研究。

3、根據(jù)研究一優(yōu)化建立的實驗性阿爾茨海默病動物模型大鼠14只，隨機(jī)分為2組：①AD模型加雌二醇治療組(AD+E<,2>組)；②AD模型組(AD組)。每組大鼠7只。雌二醇補(bǔ)充療法參照Gundlah等用藥方法和給藥時間，補(bǔ)充外源性苯甲酸雌二醇(1mg/Kg)，皮下注射，每7d1次，共4次。應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)染色和免疫熒光細(xì)胞技術(shù)觀察皮質(zhì)區(qū)、海馬CA1區(qū)等部位Aβ<,1-40>和β分泌酶陽性細(xì)胞表達(dá)的變化。Olympus光學(xué)顯微鏡下計數(shù)各腦區(qū)平均單

4、個視野的陽性細(xì)胞數(shù)量。 結(jié)果： 研究一：雙側(cè)穹隆-海馬傘切斷與否在雙側(cè)卵巢非切除狀態(tài)下存在顯著作用，雙側(cè)穹隆-海馬傘切斷導(dǎo)致各腦區(qū)A β<,1-40>陽性細(xì)胞表達(dá)顯著增多(p<0.01)。雙側(cè)卵巢切除與否在雙側(cè)穹隆.海馬傘非切斷狀態(tài)下存在顯著作用，雙側(cè)卵巢切除導(dǎo)致各腦區(qū)Aβ<,1-40>陽性細(xì)胞表達(dá)顯著增多(p<0.01)。雙側(cè)穹隆-海馬傘切斷與否與雙側(cè)卵巢切除與否對海馬CA1區(qū)、杏仁復(fù)合體區(qū)、基底前腦Meynert核區(qū)

5、A β<,1-40>陽性細(xì)胞表達(dá)存在顯著交互作用，雙側(cè)卵巢與雙側(cè)穹隆-海馬傘切斷共同作用效應(yīng)更加顯著(p<0.01)，表現(xiàn)為穹隆-海馬傘切斷加卵巢切除狀態(tài)下海馬CA1區(qū)、杏仁復(fù)合體區(qū)、基底前腦Meynert核區(qū)Aβ<,1-40>陽性細(xì)胞表達(dá)顯著增多(p<0.05)。 研究二：在皮質(zhì)區(qū)、海馬CA1區(qū)、杏仁復(fù)合體區(qū)、Meynert核區(qū)，AD+E<,2>組與AD組比較，A β<,1-40>陽性細(xì)胞計數(shù)減少，差異具有顯著性(均p<0.0