蝎毒耐熱蛋白對海馬注射淀粉樣β蛋白致阿爾茨海默病大鼠模型作用的研究.pdf

1、背景：阿爾茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD)是引起癡呆的最常見疾病。隨著人口老齡化的發(fā)展，AD已成為影響老年人健康的一個突出問題，嚴(yán)重威脅著老年人的身體健康和生活質(zhì)量。AD的病因和發(fā)病機(jī)制目前還不清楚，對于AD至今尚無有效的治療方法，目前仍以對癥治療為主。由于缺乏一種與AD病理和行為等改變相似的理想動物模型，使AD基礎(chǔ)研究和藥物開發(fā)受到限制。近年來經(jīng)過研究，大多數(shù)學(xué)者支持淀粉樣β蛋白(amyloid beta pr

2、otein，A β)學(xué)說，認(rèn)為A β的產(chǎn)生及其沉積可能是AD致病的核心誘導(dǎo)因素。 目的：本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用Aβ<,1-40>進(jìn)行海馬注射復(fù)制AD大鼠模型，進(jìn)而給予蝎毒耐熱蛋白(Scorpion Venom heat-resistant protein，SVHRP)進(jìn)行干預(yù)，通過觀察行為學(xué)、星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞突觸的變化，檢測Aβ<,1-40>海馬注射是否可建立一種可靠的動物模型，并研究SVHRP對AD模型大鼠的治療效果，探討AD的

3、發(fā)病機(jī)制和治療機(jī)理。 方法：實(shí)驗(yàn)動物sprague-Dawley(SD)大鼠24只，雄性，體重300g±50g。行水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行初步篩選，然后隨機(jī)分為3組，即正常對照組9只，AD模型組8只，SVHRP干預(yù)組7只。參照文獻(xiàn)利用腦立體定位儀進(jìn)行雙側(cè)海馬定位注射，正常對照組注射溶媒液，AD模型組和SVHRP干預(yù)組注射聚集狀態(tài)的Aβ<,1-40>。術(shù)后SVHRP干預(yù)組大鼠腹腔注射SVHRP，正常對照組和AD模型組腹腔注射三蒸水連續(xù)干預(yù)1

4、0天。然后開始為期5天的水迷宮測試，記錄大鼠尋找平臺的逃避潛伏期以及大鼠在目標(biāo)象限游泳距離百分比和游泳時間百分比。測試后4﹪多聚甲醛(paraformaldehyde，PFA)心臟灌注固定，取腦，放入4﹪PFA中后固定24小時，梯度蔗糖脫水，OCT包埋劑包埋后行冰凍切片。以注射點(diǎn)為中心連續(xù)冠狀切片，厚10μm。進(jìn)行GFAP、p3 8免疫組織化學(xué)染色。應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行GFAP陽性表達(dá)細(xì)胞計(jì)數(shù)、p38免疫陽性產(chǎn)物累積光密度(integr

5、ated optical density，IOD)及面積測量。所有數(shù)據(jù)用SPSS11．5軟件包處理分析。 結(jié)果： 1．Morris水迷宮(Morris Water maze，MWM)行為學(xué)測試實(shí)驗(yàn)結(jié)果： (1)定位航行實(shí)驗(yàn)：5天逃避潛伏期比較，模型組大鼠長于對照組、干預(yù)組大鼠，5天逃避潛伏期變化趨勢看，對照組逃避潛伏期越來越短，而模型組和干預(yù)組逃避潛伏期上下波動，其中干預(yù)組相對于模型組波動較小。 (2)空

6、間搜索實(shí)驗(yàn)：模型組大鼠與對照組、干預(yù)組比較，在目標(biāo)象限(平臺象限)內(nèi)游泳搜索的距離、時間都明顯減少。 2．GFAP免疫組織化學(xué)染色結(jié)果： 模型組針道周圍GFAP陽性表達(dá)與對照組、干預(yù)組比較可見，紐胞數(shù)量明顯增多(p<0.05或p<0.01)．，胞體肥大、形態(tài)各異，突起增長、增粗、不規(guī)則、染色加深；而對照組與干預(yù)組無顯著差異。 3．p38免疫組織化學(xué)染色結(jié)果： 模型組免疫產(chǎn)物與對照組、干預(yù)組比較，陽性產(chǎn)物稀