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文檔簡介
1、目的:以細(xì)胞形態(tài)改變和tau蛋白過度磷酸化為反映AD(Alzheimer's Disease)發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵指標(biāo),初步探明實驗性AD誘導(dǎo)產(chǎn)生過程中的P17EN變化狀況及其與tau蛋白過度磷酸化的關(guān)系,以深化理解AD的發(fā)病機制。 方法:①采用岡田酸(Okadaic acid,OA)誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞和NG108-15細(xì)胞,以細(xì)胞形態(tài)改變和tau蛋白過度磷酸化為觀察指標(biāo),建立用于AD研究的細(xì)胞模型。②倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化
2、。③Western blot法測定SH-SY5Y細(xì)胞和NG108-15細(xì)胞Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。④RT-PcR方法觀測SH-SY5Y細(xì)胞PTEN mRNA水平。 結(jié)果:1-岡田酸誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞AD樣發(fā)生發(fā)展中PTEN的變化:①OA孵育SH-SY5Y細(xì)胞可顯著改變細(xì)胞的形態(tài),隨OA孵育時間的延長,6 h后細(xì)胞開始變圓,突觸縮回,18 h后細(xì)胞大部分變圓,突觸消失,48 h后細(xì)胞漂浮生
3、長,部分細(xì)胞呈死亡狀態(tài);40:nmol/LOA作用于細(xì)胞,Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平在OA孵育后12 h顯著升高, 18 h、24 h達高峰,之后下降,48h顯著降低。提示OA可誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞進行性損傷變性和tau蛋白過度磷酸化。②40 nmol/L OA孵育SH.SY5Y細(xì)胞,同時觀測細(xì)胞中Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平隨OA作用時間的變化,可見Ser<'396>位點磷酸化tau蛋
4、白水平變化同上,而PTEN蛋白水平則于3 h、6 h顯著升高,6 h達高峰,之后下降,48 h顯著降低。提示在OA誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞AD樣發(fā)生發(fā)展過程中,PTEN蛋白水平呈先升高后降低的變化。③40nmol/L OA作用于SH-SY5Y細(xì)胞,PTEN mRNA水平于12 h、18 h、24 h顯著升高,其它時間點未見明顯變化,提示在OA誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞AD樣發(fā)生發(fā)展過程中,PTEN mRNA水平存在著變化。2.岡田酸誘導(dǎo)NG1
5、08-15細(xì)胞AD樣發(fā)生發(fā)展中.PTEN的變化:①OA孵育NG108-15細(xì)胞,隨OA孵育時間的延長,6 h后細(xì)胞未見明顯變化,18 h后細(xì)胞變圓,開始貼壁不牢,48 h后細(xì)胞呈懸浮生長,但胞壁完整;20 nmol/L OA作用于細(xì)胞,Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平在OA孵育后6 h開始顯著升高,18 h達高峰,48 h仍然顯著升高。提示隨OA孵育時間的延長,NG108-15細(xì)胞可發(fā)生進行性損傷變性,但由于孵育時間不夠長,細(xì)
6、胞并沒有開始壞死;OA可誘導(dǎo)NG108-15細(xì)胞tau蛋白過度磷酸化。②20 nmol/L OA孵育NG108-15細(xì)胞,同時觀測細(xì)胞中Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。隨OA作用時間的變化,可見Ser<'396>位點磷酸化tau蛋白水平變化同上, PTEN蛋白水平則于12 h、18 h、24 h顯著升高,18 h達高峰,其余時間點未見顯著變化,提示在OA誘導(dǎo)NG108-15細(xì)胞AD樣發(fā)生過程中,PTEN蛋白
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