絞肌藍(lán)熱處理產(chǎn)物抗NSCLCA549細(xì)胞有效成分研究.pdf

1、絞股藍(lán)經(jīng)高溫、高壓熱處理得到的絞股藍(lán)熱處理產(chǎn)物與原藥材相比，具有很強(qiáng)的抑制非小細(xì)胞肺癌(Non-smallcelllungcarcinoma，NSCLC)A549細(xì)胞的增殖活性。
　　 本研究目的：以絞股藍(lán)熱處理產(chǎn)物為研究對象，分離、鑒定其有效成分，并評價它們對A549細(xì)胞增殖的抑制作用。研究方法:分別通過100、110、120和130℃及加熱1h、2h和3h，確立制備絞股藍(lán)熱處理產(chǎn)物的最佳條件;利用大孔樹脂HP20吸附法，通過

2、20％、50％及95％乙醇洗脫溶劑洗脫，篩選有效部位;采用硅膠柱色譜、凝膠色譜及反相C18色譜法，分離有效成分;通過NMR、Mass、UV等分析手段，鑒定有效成分的分子結(jié)構(gòu);運(yùn)用MTT法檢測絞股藍(lán)熱處理前后總提物及有效成分對A549細(xì)胞增殖的作用;利用UPLC-MS分析。
　　 方法：測定不同熱處理?xiàng)l件下的絞股藍(lán)熱處理產(chǎn)物及原藥材中有效成分的含量。
　　 研究結(jié)果：(1)絞股藍(lán)熱處理產(chǎn)物的最佳制備條件為130℃、0.24

3、MPa熱處理3h，其乙醇提取物與原藥材乙醇提取物相比，具有更強(qiáng)的抑制A549細(xì)胞增殖作用，其IC50±SD值為198.13±7.60μg/mL，而原藥材乙醇提取物為411.61±32.43μg/mL。(2)絞股藍(lán)熱處理產(chǎn)物在大孔樹脂HP20的不同極性洗脫部位中，95％乙醇洗脫部位對A549細(xì)胞增殖具有較強(qiáng)的抑制作用。(3)從95％乙醇洗脫部位中分離、鑒定出4種達(dá)瑪烷類皂苷，分別為達(dá)木林A(damulinA)、達(dá)木林B(damulinB)

4、、絞股藍(lán)皂苷LI(gypenosideLI)及絞股藍(lán)皂苷L(gypenosideL)，其中達(dá)木林A與達(dá)木林B是絞股藍(lán)熱處理后新發(fā)現(xiàn)的化合物。(4)這四種化合物均具有較強(qiáng)的抑制A549細(xì)胞增殖作用，其IC50±SD值分別為26.98±0.51、4.56±0.58、50.96±9.55及34.94±4.23μg/mL，而陽性對照物人參皂苷Rg3(S)為39.26±2.05μg/mL。(5)四種達(dá)瑪烷類皂苷在絞股藍(lán)中的含量檢測結(jié)果，在相同加熱

5、時間條件下，隨著熱處理溫度的升高而增加;在同等溫度條件下，隨加熱時間的增加而提高，最佳條件為130℃溫度、0.24MPa壓力、熱處理3h，此時的絞股藍(lán)熱處理產(chǎn)物中含達(dá)木林A、達(dá)木林B、絞股藍(lán)皂苷LI(gypenosideLI)及絞股藍(lán)皂苷L(gypenosideL)分別為11902.19±0.18，5876.64±0.50，2462.52±0.21，6130.26±0.27μg/g。
　　 結(jié)論：熱處理方法可以成為一種從天然物中