通心絡(luò)超微粉劑對(duì)ET-1誘發(fā)兔冠狀動(dòng)脈痙攣后血管NF-κB、iNOS等因子的影響.pdf

1、目的： 應(yīng)用通心絡(luò)超微粉劑干預(yù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物日本大耳白兔5天后，用內(nèi)皮素-1(ET-1)靜脈注射建立冠狀動(dòng)脈痙攣模型，檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物冠狀動(dòng)脈血管中核因子-kappaB(NF-kB)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)等因子的表達(dá)，觀察通心絡(luò)超微粉劑對(duì)血管NF-kB、iNOS等表達(dá)的影響，探討通心絡(luò)超微粉劑緩解冠狀動(dòng)脈痙攣的可能機(jī)制。 方法： 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組將雄性日本大耳白兔30只隨機(jī)分為5組(每組6只)，分別為：

2、 (1)對(duì)照組(生理鹽水組，10ml/day)，(2)通心絡(luò)超微粉劑(TXL)低劑量組(150mg/kg/day)，(3)通心絡(luò)超微粉劑中劑量組(300mg/kg/day)，(4)通心絡(luò)超微粉劑高劑量組(600mg/kg/day)，(5)地爾硫卓組(10mg/kg/day)。 以上藥物均用10ml生理鹽水溶解后通過灌胃方法給藥5天，每日一次。 2、動(dòng)物模型建立各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于試驗(yàn)前一天晚開始禁食18小時(shí)，可自由進(jìn)水。ET

3、-1注射前30分種給予相應(yīng)干預(yù)藥物灌胃。ET-1注射前15min腹腔內(nèi)注射烏拉坦(1000mg/Kg/10ml)麻醉兔后將兔俯臥固定于兔手術(shù)臺(tái)上，連接體表心電圖。試驗(yàn)開始后通過兔耳緣靜脈彈丸式注射ET-1(1.4 nmol/kg)誘發(fā)冠狀動(dòng)脈痙攣，連續(xù)描記標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖，觀察心電圖T波改變。 3、血清學(xué)標(biāo)本留取于ET-1注射前及注射后2h、6h分別于耳緣靜脈取血5ml，靜置待凝，3000rpm離心后，分離血清置入1.5ml

4、 EP管待用。 4、動(dòng)物處死，留取組織標(biāo)本ET-1注射后6h，靜脈注射肝素300IU/Kg，兩min后頸動(dòng)脈放血后固定于解剖臺(tái)，開胸，斷肋，暴露心包，迅速取出心臟、分離出冠狀動(dòng)脈，4℃肝素生理鹽水沖洗后，分別置于液氮中保存。 5、各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè) (1)心電圖T波高度改變：應(yīng)用Medlab6.0系統(tǒng)自動(dòng)測(cè)量ET-1注射前及注射后3、5、15、30min描記的心電圖標(biāo)準(zhǔn)肢體導(dǎo)聯(lián)T波高度，取平均值。數(shù)值以百分?jǐn)?shù)形式體現(xiàn)，

5、表示T-波升高值占應(yīng)用ET-1前的高度值的百分比。 (2)血清心肌壞死標(biāo)志物(TnI)含量測(cè)定：?。篍T-1注射前及注射后0.5h、2h、6h的血清標(biāo)本，用兔血清肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑盒(96孔板，ELLISA法)檢測(cè)血清TnI濃度。 (3)冠狀動(dòng)脈NF-kB及iNOS表達(dá)檢測(cè)：用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法測(cè)定冠狀動(dòng)脈血管中iNOS及NF-kB表達(dá)，測(cè)定各組目的條帶的平均灰度積分值(產(chǎn)物的面積×產(chǎn)物的平均灰度)，

6、并以β-actin作為內(nèi)參照，計(jì)算目的條帶的相對(duì)灰度積分值。 (4)冠狀動(dòng)脈NF-kB活性檢測(cè)：用NF-kB活性檢測(cè)試劑盒(96孔板，ELISA法)測(cè)定各組冠狀動(dòng)脈NF-kB活性，比較各組血管NF-kB活性的差異。 6、統(tǒng)計(jì)分析方法 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示。多組計(jì)量資料均數(shù)差別的比較運(yùn)用單因素方差分析，組間比較方差齊時(shí)用LSD檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)用Dunnett's T3檢驗(yàn)，兩樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。

7、顯著性水平P值界限定為0.05。各統(tǒng)計(jì)資料均用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。 結(jié)果： 1、冠狀動(dòng)脈痙攣前后T波高度改變于ET-1注射后5min最明顯。TXL中劑量組，TXL高劑量組和地爾硫卓組用藥后5min和10min與對(duì)照組相比，T波高度改變有顯著性差異(P<0.05)，TXL低劑量組的T波高度改變與對(duì)照組相比無顯著性差異(P>0.05)。TXL高劑量組在ET-1注射后5min的T波高度改變與地爾硫卓組相比有顯著性差異

8、(P<0.05)，TXL中劑量組與地爾硫卓組相比無顯著性差異(P>0.05)。 2、各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清TnI于ET-1注射后2小時(shí)即升高，此時(shí)僅TXL中劑量組和TXL高劑量組血清TnI與基線比無顯著性差異(P>0.05)，對(duì)照組、TXL低劑量組和地爾硫卓組血清TnI水平與基線相比均顯著升高(P<0.05)，而在ET-1注射后6小時(shí)，僅TXL高劑量組血清TnI與基線比無顯著性差異(P>0.05)。與對(duì)照組相比，ET-1注射后6小時(shí)T

9、XL中劑量組，TXL高劑量組和地爾硫卓組血清TnI差異顯著(P<0.05)，TXL低劑量組無明顯差異(P>0.05)。ET-1注射后6小時(shí)，TXL高劑量組血清TnI與地爾硫卓組相比有顯著性差異(P<0.05)。 3、冠狀動(dòng)脈NF-kB RT-PCR結(jié)果顯示對(duì)照組NF-kB的表達(dá)條帶最亮，TXL低劑量組和地爾硫卓組次之，TXL中劑量組和TXL高劑量組最暗。 4、冠狀動(dòng)脈iNOS RT-PCR結(jié)果顯示對(duì)照組iNOS的表達(dá)條帶

10、最亮，TXL低劑量組和地爾硫卓組次之，TXL中劑量組和TXL高劑量組最暗。 5、與對(duì)照組相比，TXL高劑量組冠狀動(dòng)脈NF-kB活性有顯著性差異(P<0.05)，TXL低劑量組、TXL中劑量組和地爾硫卓組無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1、通過用ET-1耳緣靜脈注射能成功建立兔冠狀動(dòng)脈痙攣模型。 2、通心絡(luò)超微粉劑的應(yīng)用能夠降低冠狀動(dòng)脈痙攣時(shí)心電圖T波的升高，降低血清心肌損傷標(biāo)志物TnI的水平，從而